海藻酸钠_壳聚糖微球制备及质量评价研究_崔红华.docx

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1、海藻酸钠_壳聚糖微球制备及质量评价研究_崔红华海藻酸钠-壳聚糖微球制备及质量评价研究崔红华1,李超英2*,李敏2,高雅言2,赵晶丽3(1.吉林大学第四临床医院,吉林长春130011;2.长春中医药大学,吉林长春130117;3.吉林工业职业技术学院,吉林吉林132021)摘要目的:研究制备海藻酸钠-壳聚糖葫芦素微球,并对其质量评价及体外释药进行研究。方法:采用滴制法制备海藻酸钠-壳聚糖微球,采用显微观察评价微球的粒径、圆整度及形态学特征,并以葫芦素(CU)为评价指标测定微球的载药量、包封率及体外释药规律。结果:本研究制备的微球粒径均一,圆整度良好,包封率为78.72%,载药量为17.50%。体

2、外释药实验表明,释药时间长达60h,释药曲线均符合Higuchi方程,微球制剂为缓控释制剂。结论:本研究采用微球的制备方法简便可行,研制的微球能明显延缓药物释放,且无突释现象。因而海藻酸钠-壳聚糖微球可作为药物缓控释载体,本研究可为药物缓控释制剂的研究提供理论根据。关键词微球;海藻酸钠-壳聚糖;体外释药中图分类号R943文献标志码A文章编号1007-4813(2020)05-0844-03基金项目:吉林省科学技术厅发展项目(编号:202005101)。作者简介:崔红华(1960-),女,大学本科,副主任药师。研究方向:临床药学。*通信作者:李超英,博士,教授,Tel:135*,E-mail:c

3、haoyinglili微球是缓控释新型给药系统,根据不同的需要能够作为口服剂、注射剂等使用,具有潜在的应用价值,成为国内外医药研究和应用的趋势。制备的微球主要有白蛋白微球1、明胶微球2、聚乳酸微球3等,根据材料性质的不同,能够采用溶剂挥发法4、喷雾枯燥法5等进行微球制备。但是有些材料和制备方法存在一定的弊端,如聚氰基丙烯酸酯等,在体内不容易降解和代谢,在制备经过中多用有机溶剂,如固化剂甲醛、戊二醛等,残留在制剂中不容易除去,且有些方法在制备经过中需要在高温条件下进行,对药物稳定性具有一定影响。本研究采用可生物降解的海藻酸钠和壳聚糖为材料,制备经过不加有机试剂,并且反响条件温和。葫芦素(cucu

4、rbitacin,CU)系从葫芦科植物甜瓜蒂(PedicellusMelo)提取分离而得,是治疗肝炎和肝癌的有效成分,其中主要成分为葫芦素B(CUB)6。为提高药物的生物利用度、降低毒性作用,将其制备成微球制剂,到达缓释的作用,本文以其主要药用成分CU为指标对其载药量、包封率及体外释药进行研究。1实验材料1.1仪器TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);Al204型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);KQ3200DB型速控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SHA-CA水浴恒温振荡器(江苏金坛市精达仪器制造厂);SZ-1涡旋混匀机(江苏金坛江南仪器厂);HJ-

5、5多功能搅拌器(常州日华电器有限公司)。1.2试药与试剂葫芦素B对照品(CUB)(纯度质量分数为98.85%,购自天津药物研究院),甜瓜蒂提取物(本实验室自制),壳聚糖(中脱乙酰度75.089.0%,批号090303,购自沈阳鑫盛生物科技有限公司),海藻酸钠(黏度8mpa.s,批号090312,购自青岛晶岩生物科技开发有限公司),十二烷基硫酸钠、氯化钙、香草醛、乙酸、三氯甲烷、磷酸二氢钠、氢氧化钠、冰醋酸、高氯酸、硫酸均为分析纯。2实验内容2.1微球的制备本研究采用滴制法制备海藻酸钠-壳聚糖微球。将一定量药物溶解于海藻酸钠水溶液中,混合均匀,滴入含有一定量氯化钙的壳聚糖溶液中,并搅拌一定时间取

6、出,蒸馏水洗涤数次,室温枯燥,即得。2.2载药微球的评价2.2.1微球形态学特征枯燥前的微球为白色的实体球,外表光滑,具有一定的硬度,正圆形,见图1。枯燥后的微球略显黄色,显微镜下观察外表有诸多皱纹,微球缩水皱缩所致,见图2。2.2.2微球粒径及分布根据微球制备方法制备三批微球,采用显微镜测定微球的粒径大小。随机取制)844)备的微球适量,测定每个球体三个角度的直径,防止球体不圆整测量不准,计算微球的平均粒径和粒径分布状况。结果制备3批微球的平均粒径为342.8Lm,337.6Lm,322.5Lm,平均粒径为(334.3?10.54)Lm,表明微球粒径大小较均一,粒径分布较窄,分散性好。图1微

7、球图片图2微球显微图片(4)2.2.3微球的圆整度在3批微球样品中,每批微球取出100粒,采用/2.2.2微球粒径及分布0项下方法测定每1微球3个不同角度的粒径,计算RSD值。根据微球粒径的RSD值为微球打分,详细打分标准如下:RSD值=02%,圆整度很好,10分;RSD值=2%4%,圆整度良好,8分;RSD值=4%6%,圆整度较好,6分;RSD值=6%8%,圆整度一般,4分;RSD值=8%10%,圆整度稍差,2分;RSD值10%,圆整度不好,0分。经测定,微球粒径的RSD值为3.15%,微球的圆整度良好。2.2.4CU含量测定方法学研究2.2.4.1CU对照品、供试品溶液的制备对照品溶液的制

8、备:精细称取CUB对照品10mg,置10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,制备成1.0mg/mL的CUB对照品溶液。供试品溶液的制备:分别精细称取载药微球制剂及空白微球各25mg,加1mL蒸馏水浸泡30min,研磨至均匀胶浆,参加2mL三氯甲烷,漩涡10min后,3800r/min离心10min,取三氯甲烷层。再次参加三氯甲烷,同上处理,反复3次,合并三氯甲烷层,备用。2.2.4.2CU检测波长确实定称取CU成分,采用香草醛-冰醋酸法显色,紫外分光光度计400700nm波长范围扫描。CU在532nm处有最大吸收峰,故确定检测波长为532nm。2.2.4.3CU线性关系确实定精细汲取CUB对照品溶

9、液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置于容量瓶中,配成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL溶液,采用香草醛冰醋酸反响显色在532nm处检测。以吸光度值(Y)对浓度(X)进行线性回归,得到回归方程:Y=0.7834X+0.0318(R=0.9992),结果表明,CU的检测浓度在0.10.6mg/mL呈良好的线性关系。2.2.4.4精细度实验精细汲取CUB对照品溶液0.3mg/mL,香草醛-冰醋酸反响显色后,在532nm处连续测定5次,计算精细度。结果其RSD为0.58%,表明仪器精细度良好。2.2.4.5稳定性实验精细汲取CU供试品溶液,香草醛-冰醋酸反响显色

10、后,532nm处测定,测定时间分别为10、20、30、45min,1、2、3、4h。结果显示,CU在4h内测试稳定,RSD值为1.47%。2.2.4.6重现性实验制备CU供试品溶液5分,精细汲取1mL,香草醛-冰醋酸反响显色后,在532nm处测定,计算RSD值。结果表明供试品溶液重现性RSD=2.07%,样品重现性良好。2.2.4.7回收率实验精细称取15mg的微球制剂,分别参加1B0.8、1B1、1B1.23种浓度的标准品溶液,根据供试品处理方法制备,在532nm处测定,代入标准曲线求其含量。根据各样品的参加量,计算其回收率。结果表明,高、中、低3种浓度的回收率分别为96.05%,95.83

11、%,95.94%,RSD值为0.46%,0.52%,0.60%,表明供试品测试的制备方法可行。2.2.4.8微球中药物的含量测定精细汲取3批样品的供试品溶液,60e水浴挥干,参加0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液,再参加0.8mL高氯酸,水浴60e反响15min,冷却至室温,参加冰醋酸5mL,532nm处测定吸光度值,根据标准曲线法计算含量。空白为空白微球在供试品一样条件下的反响溶液。微球中CU的含量为20.48mg/g。2.2.5载药量及包封率测定测定微球中皂苷的含量,根据公式:载药量%=(微球中药物的重量/微球重量)100%,包封率%=(微球中药物的重量/投入的总药量)100%计算载药量及包

12、封率。结果微球的包封率为78.72%,载药量为17.50%。2.3微球体外释药研究分别精细称取微球制剂及空白微球各0.5g置透析袋中,以50mLpH7.2的磷酸盐缓冲液(含5%的十二烷基硫酸钠)为释放介质,置于水浴恒温振荡器中,控制温度在(37?0.5)e,)845)搅拌速度为50r/min,于不同时间30min,1、2、4、6、8、10、22、26、30、34、46、52、60h)取样5mL,同时补充同体积同温度的释放介质5mL。透析样品根据供试品溶液的制备方法处理,采用香草醛冰醋酸反响检测透析液中的CU的含量。以取样时间(t)为横坐标,累积释放百分率(%)为纵坐标绘制释放曲线。对释放曲线进

13、行零级,一级,Higuchi方程拟合,由拟合方程得知,CU的释放曲线符合Higuchi方程,制备的微球均具有缓释作用。结果见表1。表1微球体外释放拟合方程及相关系数释药方程形式拟合方程相关系数/r零级方程Y=0.0119X+0.08170.9195一级方程ln(1-Y)=0.0200X+0.05740.9648Higuchi方程Y=0.1045X1/2-0.08280.9813图3微球体外释药曲线图3结果与讨论311微球的制备方法有很多,一般较为复杂,且多有有机溶剂介入,有的需要在高温条件下进行制备,对药物微球的稳定性及使用的安全性具有一定的影响。本实验制备微球的辅料海藻酸钠和壳聚糖均为可生物

14、降解的无毒性材料,其生物相容性好,制备工艺简单,无有机试剂介入,安全可靠。3.2本研究制备的微球粒径为(334.3?10.54)Lm,大小均一,分布较窄,圆整度良好,枯燥后的微球外表不光滑,具有一定的纹理,主要是微球缩水构成的,微球吸水后膨胀,纹理睬渐渐舒展开,构成外表光滑的球体。3.3制备的微球体外释药考察结果表明,30min时,微球中药物释放量均小于20%,避免了药物的突释现象。通过零级(R=0.9195)、一级(R=0.9648)、Higuchi(R=0.9813)方程拟合可见,皂苷的释放符合Higuchi方程,微球具有缓释作用。分析原因,海藻酸钠与壳聚糖在水中构成黏稠状物质,包裹在微球

15、的外表,阻碍药物溶出,同时水性凝胶本身也会阻碍药物的溶出,到达长效给药的目的。药物在释放经过中,首先是微球吸收释放介质膨胀,释放介质渗入微球内部,将内部的药物溶解到介质里,主要依靠药物的扩散作用。另外,溶液的穿透力导致微球的外壳逐步降解或崩解,使内部药物溶出。所以,释放经过由扩散经过与降解经过共同控制。本实验研究的微球制备方法简便可行,微球属于缓释制剂,因而海藻酸钠-壳聚糖微球作为药物的缓释载体,具有一定的应用前景。参考文献:1邹东娜,张典瑞,张学顺,等.苦参碱白蛋白微球的制备及性质J.中国医药工业杂志,2006(12):824-827.2刘琳娜,李欣,梅其炳,等.尼莫地平明胶微球的制备及其性

16、质研究J.华西药学杂志,2006(3):243-245.3汪自然,徐启勇,叶燕青.复乳法制备聚乳酸及其共聚物微球参数的研究进展J.国际生物医学工程杂志,2006(4):238-242.4李岩,孙殿甲,毕殿洲.聚乳酸、聚乳酸乙醇酸共聚物微球的制备及体外释放影响因素研究进展J.中国当代应用药学,2002(4):281-284.5盛江峰,马淳安,张诚,等.喷雾枯燥法制备偏钨酸铵微球时的形貌与粒度J.高校化学工程学报,2020(1):122-127.6金岩,杨君.葫芦素脂质体的制备及包封率测定J.山西医药杂志,2020(8):721-722.(收稿日期:2020-06-23)(上接第780页)统的抑制

17、作用,缓解临床症状和促进清醒,是治疗急性乙醇中毒的首选药2。醒脑静注射液组方源自安宫牛黄丸,内含麝香、冰片、栀子、郁金等,具有通窍醒脑、清热解毒、凉血活血作用。实验研究3证明,醒脑静注射液救治急性乙醇中毒患者催醒的同时,可明显降低患者血浆B-内啡肽,使超氧化物歧化酶(SOD)水平升高。醒脑静注射液静脉给药易于通过血)脑屏障直接作用于神经细胞,能加强中枢神经系统对缺氧的耐受能力,改善脑细胞的水盐代谢,减轻脑水肿,降低颅内压,减轻脑细胞损害,有利于乙醇中毒患者的意识转清,对急性乙醇中毒引起的昏睡、昏迷有满意疗效。参考文献:1钟志越,刘国平.纳络酮治疗急性乙醇重度中毒疗效观察J.临床急诊杂志,2001,2(5):35.2刘杰.纳络酮治疗急性酒精中毒112例临床分析J.广东医学,2002,23(9):986.3荆晓明.急性酒精中毒患者血清B-内啡肽水平及意义J.中华急诊医学杂志,2001,10(8):257.(收稿日期:2020-04-06)846)