生醫所核酸定序服務.doc

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1、DNA Sequencing Service 核酸定序服務 簡介簡介 核酸定序儀 (ABI PRISM 3730 DNA Analyzer) 是一自動化、高工作效的毛 細管電泳系統，每一次反應可同時偵測96組螢光標定的DNA片段樣品。用毛細管電 泳技術將這些長短一的DNA片段分，並以CCD偵測每一片段同螢光的組合判 DNA鹽基的排順序。 DNA定序樣品種定序樣品種及濃及濃要求要求: 因分析儀器為毛細管系統，樣品請務必以分光光分光光儀定儀定，濃度過高或過少的樣品都 會導致分析結果，甚至堵毛細管。注意:若待分析的DNA定序樣品分子量過大或是有特殊結構特殊結構(如如GC-rich)，請於第一次 送樣

2、前先與核酸定序室工作人員林岱枏聯絡，TEL：27899527。並在申請單上註明。樣品規定請見下表:DNA type Concentration required (Use cores primer)Concentration required (Use your primer)Total volume10l (DNA only)*12l (DNA+Primer)Plasmid/dsDNA 50-75 ng/l (Total 0.5g)50-75 ng/l, (Total 0.5g)Single-stranded DNA 25-50 ng/l 25-50 ng/l PCR product 13n

3、g/100bp13ng/100bp Your custom primer -3.2M 9.6M (3.2-9.6 pmol/l), 體積:2l .*備註: 不論是否使用公儀提供的primer, 請提供10l DNA, 您如要添加您自己的primer, 請放 入濃度3.2-9.6M, 體積2l(或約40ng)即可!因此總體積是12l.核心實驗室提供的核心實驗室提供的primer: 我們也提供您五種可選擇的primer:Primer supported by Core Facility LaboratoryPrimer typePrimer sequence21M13 Forward Primer

4、5 GTT TTC CCA GTC ACG AC 3 (17 mer)21M13 Reverse Primer5 CAG GAA ACA GCT ATG AC 3 (17 mer)T7 Primer5 TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3 (20 mer)SP6 Primer5 TAT TTA GGT GAC ACT ATA G 3 (19 mer)T7 Terminator Primer5 GCT AGT TAT TGC TCA GCG G 3 (19 mer)T3 Primer5 CCA TTA ACC CTC ACT AAA GG 3 (20 mer) 如您點選核心實

5、驗室所提供的primer時， 建議您盡量將使用同種類primer的樣品連續 排列，以加速實驗室人員作業。製備模板製備模板DNA及送樣注意事項：及送樣注意事項：1. 樣品DNA以Nuclease-free water or ddH2O回溶後使用(建議將樣品DNA溶於TE buffer 或是含有EDTA等抑制物之溶劑內。) 2. DNA純 a. 能有鹽、蛋白質、RNA或是一些Detergent(如TritonX-100或SDS等)的殘。 b. 是Plasmid DNA 或PCR產物必須以電泳膠確認其純及是否為單一片段產物。請經過純化步驟再送件。c. 使用分光光儀進OD260/OD280之測定，一般

6、建議之比值需介於1.6-1.8之範圍。 3. 第一次使用您個人的Primer定序時，請先以實驗室PCR機器作反應並跑膠，確 認該primer可正確的黏合於模板DNA，且為單一產物 (建議primer Tm = 52 C55C) 。有其他特殊PCR條件也請在申請單上加以註明。 4. 檢體命名及排放原則 命名部分： 檢體命名因為系統轉檔，相容性只能 14 個字元；檢體命名時不可以重複。 檢體命名可使用字元如下：數字：1 2 3 4 5 6 7 8 9 0英文字母：A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Za b c d e f g h I j k l m n o p q r s t u v w x y z符號：- 和 _ 可接受。其他特殊符號(包括空格)請勿使用。 檢體排放： 需需“添加添加 primer“之檢體，請將同一種之檢體，請將同一種 primer 排放一起。排放一起。