滤食率检测作业指导书.doc

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1、滤食率检测作业指导书滤食率检测作业指导书1.1.试验生物试验生物1.1 受试生物的选择1.1.1 受试生物一般选用双壳类滤食性动物，建议采用以下生物种：贻贝、菲律宾蛤仔、蛤唎等。此外其他滤食性动物也可考虑。1.1.2 受试生物的选择应遵循以下原则：栖息于非污染区、生长良好、健康无病的个体；对污染反应较敏感的种类；地理分布较广、数量较大，全年在某一实际海区容易采到的，并对其生活习性清楚，易在实验室条件下培养的种类；受试生物来源于同一地点、同一种群，力求个体大小基本一致；选用受试生物的早期发育阶段（受精卵、幼体） 。2.2.污染水样的处理及试液的制备污染水样的处理及试液的制备2.1 污染水样采集及

2、处理2.1.1 采样应用无毒容器，水样应装满，以免运输过程剧烈摇荡而改变某些水质特性。采集的水样量，应按实验设计和次数备足。同一系列试验，应用同时同地采的污水。2.1.2 采水时应记录采样时间、地点，现场测量水温，并观察记录污染的表观现象。2.1.3 采回的水样最好立即用于实验，若需放置，应低温保存。水样应进行化学分析，测定其盐度、PH、水温、溶解氧、化学耗氧量、营养盐及主要污染物含量，为配制致毒试液提供参考。2.2 致毒试液的配制2.2.1 毒性试验的浓度范围的确定一般应做预实验。预实验可用较大浓度间隔按比级数配制污水稀释液，如：按污水体积比配制出如下浓度组：0.01%、0.1%、1.0%、

3、10%、100%。2.2.2 正式试验可根据预实验所提供的浓度范围，按相等的浓度对数间隔安排 5 个以上的试验浓度组。2.2.3 配制不同浓度的致毒试液时，应先将污水轻轻摇匀，再按需要量取一定体积用清洁海水稀释，注意海盐或除氯自来水调节其盐度，使与受试生物的适盐范围基本一致。2.2.4 若要试验某特定污染物的毒性效应，可人工配制该种污染物的储备液，然后，参照化学分析测得的污水中该污染物的含量，酌情按上述方法，用洁净海水配制试液。石油类污染物，可单独试验水溶性组分或用少量低毒性的分散剂制备乳浊液后再行配制。3.3.试验步骤试验步骤3.1 致毒试验a)根据试验需要准备若干试验缸，清洗干净后按对照组

4、和致毒浓度组的顺序编号。在各试验缸中分别加入不同浓度的试液，对照组用清洁海水。用水量按每个受试生物1.0L 计；b）选取滤食活动正常，个体大小基本一致，经驯养过的生物等数量分组移入各试验缸；c）致毒时间可为 24h、48h、96h 或更长时间，每隔24h 更换一次新试液；d）致毒期间应注意观察受试生物是否有死亡或其他异常现象，并做记录。3.2 滤食实验a)预定的致毒时间一到，把各试验缸中的试液倒弃，保留缸内生物，用海水冲洗数遍，换上等量的含藻海水。并另设一未放生物的含藻海水样作对照，以检测海水中藻类在试验时间内的浓度变化；b）含藻海水应事先配好，使水体中的藻类浓度约为11044104个/ml，

5、搅拌均匀后再加入各试验缸；c）换上含藻海水后，各试验缸要立即同时取样，经滤食 12h，再同时取样一次，记录二次取样的时间。按藻类浓度测定法，分析两次藻类浓度的变化；d）取出的水样应按实验序号记录编号，以免弄乱，应取的水样量及固定方法应按选用的藻类测定方法进行；e）滤食实验结束后，用卡尺量取各组受试生物的壳长，计算平均值记入表中。3.3 藻类浓度测定a)电子颗粒计数法：取 50ml 水样移入仪器的计数杯中，启动搅拌器，每次进样量 50ul。仪器测定条件：电眼孔器直径 100um,用过滤海水做电解液。粒径测定范围按藻类的颗粒大小分布而定。每测样应读取二次测值，取其平均值并换算成水样的藻类含量；b）

6、活体细胞荧光法：用荧光计测定水样中藻类的活体细胞荧光值，仪器的激发波长 436nm，发射波长 680nm。取 5ml 水样移到测试管中，把测试管放入吸收池，选择适当的测试量程，读取两侧测值，取其平均值与标准对照，查出水样的藻类含量。测定时用已知浓度的藻液作标准，以过滤海水做空白；4.4.记录与计算记录与计算把藻类浓度测定数据及其他有关实验数据记入表中，按式（18）计算滤食率：FR=V(lnCo-lnCt)/Nt.(18)式中：FR每个生物个体每小时滤过的海水体积，单位为升（L） ；V实验的海水体积，单位为升；N受试生物个数；t滤食时间，单位为小时；Co实验海水的藻类初始浓度，单位为个每升；Ct经滤食 t 时间后的藻类浓度，单位为个每升。该公式只适用于海水中的单细胞藻在滤食期间基本不变的情况。