分子实验室、细胞实验室常用配方_.docx

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1、分子实验室、细胞实验室常用配方_分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方作者:日期:?分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (一)WB相关试剂及常用缓冲液RIA0mI(最后要调pH为.4终浓度分子量称取50mM11.14607mgs-HCIpH.4)NaCI508.487.gTritn-101%1mI脱氧胆酸钠1gEDTAmM292.24.224mSS01.1gMSF00M)使用时每1l加l10%过硫酸铵溶液AP分装保存于-20度)AP粉末1dd210m1%SD

2、S(十二烷基硫酸钠：S粉末0gdH20定容到100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡6X蛋白质samplebufferTris-HCl(M,H6.)30L10甘油30LDTT14.5.3g溴酚蓝6gddH2定容至10m10XPB缓冲液的配制：aC80gKCl2ga2P4144(十二水合36gKHPO402.g加800mLddH2O,根据开场的pH用aOH或CL调pH到.4,调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度PBS(1X)BS(1X500mlTwee205Tris乙酸TE缓冲液配制1溶液各成分的用量ris粉末22冰醋酸57.lN2EDTA2H2O3.g分子实验

3、室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方ddH20定容到1封闭液脱脂奶粉5g叠氮钠002g(现配现用时可不加)PBS定容到10mL染色液(室温)L500ml200ml100l甲醇502510050乙酸0mL52010R20考马斯亮蓝0.5g0.2g.1g05gH240mL20840脱色液：(室温)甲醇165m乙酸0LH785m8.8Buffer:调H至8，4度保存)10ml200lTris18173.4g1SDS4mmlddH定容至100mL200ml6.Bufr:(调pH至.8,度保存)10l200lTris66g12.2g10SDS4mL8mldH20定容至00m20ml转移缓

4、冲液(1trnsbufe:常温保存1LL甘氨酸14g288Trs粉末30360.6d20定容至L定容至2L使用时甲醇200m转移缓冲液00md0700mL电泳缓冲液(1uningbffe:(常温保存LL甘氨酸144g28gTris粉末30.3g60.6SDS10g2gddH20定容至1L定容至2L10)S:常温保存)分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方NCl80.0Tis粉末242gddH20定容至LBT()TS(1X)50Twee00lStippiguffer(可反复利用)温教师组配方10SDS10l-巯基乙醇35lTriCIpH.6.5m.0加到50mL水)参加dd

5、至5mLStipingbuffer可反复利用)郭教师给配方甘氨酸15gD1Tee20mldddH2O1L作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (二)细胞和细菌培养基、抗生素LB培养基(当天灭菌后放4度存放)100ml500m0m20l200ml氯化钠10g5g25g2g蛋白胨105gg5g2g酵母提取物5g2.5g1.51.251gdH20定容至000l定容至500ml定容至0m定容至50l定容至00mlLB平板：(当天灭菌后倒平板,放4度存放1000l50ml0ml250ml00l氯化钠10g5g

6、3g5g2g蛋白胨532.5g2g酵母提取物5g25g1.5g1.25gg琼脂1g7.g3725g3gdd2定容至1000m定容至500ml定容至300l定容至50ml定容至20lB培养基将下列组分溶解在0.水中：?蛋白胨2g?酵母提取物5g?氯化钠0.5g1molL氯化钾25l用水补足体积到1L。分成00ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1m灭过菌的1mo/氯化镁1MIT异丙基硫代-D-半乳糖苷分子量为83)溶液TG粉末2383gdH20定容到10l用022m滤器过滤除菌,分装成1l小份储存于-20。Am+50mg/ml)Amp+粉末50dd201ml注意：

7、分装保存于度,使用时按100:1的比例用Kana0m/ml)Kana+粉末50mgddH0m注意:分装保存于-20度，使用时按000:的比例用胰酶:抽滤,长期保存可放负20度粉末025gED0.02-0.03gXPS100l分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方高糖DM培养基:抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠.7gddH0定容到1用盐酸调pH值到：7.-74)418母液(00g/ml用.22M滤菌，分装存于-20度粉末1gPS0mlzeocin母液100m/ml用.22滤菌,分装存于-度粉末1gH0lBlaticidi(mgml用0.22滤菌,分装存于0度粉末3gPBS1m

8、l分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (三利用Histag从细菌中纯化蛋白配方透析液配方终浓度母液浓度量取体积0mM20mlrs-l(p:80)Nal20mM45mlMCl22mM2TT1mMMl甘油50%500lddHO472ml2超声裂解液(ybuffr):2020年做蛋白纯化时用N3P4(648.2(0M)NCl58.57.55(30mM)加80mLdH2O溶解，用2MNaOH或者HCL调p到8.0,再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。洗涤液(wshbuffer):201年做蛋白纯化时用Na3PO.g(5mM)Cl7.55g(300mM咪唑01m)加8

9、0mLd2O溶解,根据开场的p用2MNH或者MHCL调pH到.0,调好pH再定容到1升洗脱液elutinbufer)：2年做蛋白纯化时用3PO4.2(5mM)al1.5g0mM咪唑1.02g(25m)加80LdH2O溶解，根据开场的pH用2NaOH或者2HCL调H到80,调好pH再定容到升)PrepEase?iste-TaggePoeii?caionKits-HghSpci?ciyLEBffr(Lyis-Equiir-WaBuffer：室温保存pH:.NaH2P.2H2O6.240g(40mMNaCl14.056(24Md2定容到100L(调节：804XEutinfer:(室温保存):.0Na

10、H2P42H3.1202g00M)NCl7.0128g.2M分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方咪唑81g(1MdH定容到100mL(调节pH:8.0A:10mM)EDTA2.92gdH0定容到100mLNiSO4:NiSO4.6H2.68g(00mH20定容到100mL溶菌酶：使用时1ml溶液参加2u)粉末50dH201L分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (四)利用His-ag从细胞中富集蛋白配方磷酸钠缓冲液按图示比例混合02MN2HO溶液和.2MNaPO溶液,得到两种缓冲液，p分别调节成为8.0和3.pH.2MNa2PO4体积/mL0.2

11、MNaH2PO4体积/m6.311.538.75.047.352.65细胞裂解液最好新鲜配制,当天使用)Cllysisuffer终浓度配m配5ml配20ml配40ml配30ml盐酸胍g)6M573188.59771.462927174Tis()10mM011140.018110.0242280.048560.03642H8.0uffer(m)100m5.5102015(注意胍盐是有害试剂注意这里用的磷酸钠缓冲液p必须8.0!(注意二价阳离子螯合剂，复原剂,会导致镍从树脂上的洗脱)本实验的所有试剂中EDTA浓度不得超过1mM,DTT浓度不超过5M，巯基乙醇浓度不超过20mM。p8.0的洗脱溶液最

12、好新鲜配制，当天使用pH8.0的wasbuffer终浓度配10l配0配20ml配4ml配30mlUre尿素(g848.0424029.6961.211.4144rs(g)10mM0.2114006570.42280.0484560.036428.NaPO4bufer(ml)100mM5025102015分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方rtonX-10(ul).%(ol/vol)10050403b-merctoehanol巯基乙醇(ul)5mM51714106.3ashbuffr(现配现用)pH63的wsuffer终浓度100ml配50ml配30lp.3的asbrre

13、a尿素(g88.048.0244144Urea尿素(g)Tris(g)10mM.12406570.036342is(gpH6NOuffer(ml100mM5021pH6.3N3Obuffe(ml)TritX-100(ul0.1(vol/vo)00500TrinX-10u)注意使用p为6.的磷酸缓冲液,而且pH不得低于6,pH要准确配制,非常重要！Histine的质子化，会导致镍树脂上的解离,所以要准确测定p,并且以H试纸校对，而不是仅仅依靠pH仪器。洗脱溶液00mMImidaoe咪唑,%(wt/volSDS，150mMTris-HC.7)30%(vl/vol)丙三醇720M巯基乙醇0025%(

14、w/vo溴酚蓝注意wt/vol是质量/体积之比例，而volvo是体积:体积的比例。分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (五)双向电泳溶液配制水化上样缓冲液I)：尿素8M4.805gHPS(4%)0.gD(M).98g(现加)Bio-yte2(w/)50I(40现加溴酚蓝0.0%10I(%溴酚蓝)MilQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存上样缓冲液II):尿素(7M)4.2g硫脲(M15gCHAPS(4%)0.4TT(6M).098g(现加B-Lye0.2%/)50I40%现加)溴酚蓝0.001%10(1%溴酚蓝)MillQ水定容到10I,分装成1小管，

15、-20度冰箱保存上样缓冲液(II尿素5M)3g硫脲2)152gHPS(%)02gSB3-10%)02gDTT(65).098g(现加)Bio-Lte0.2%w/v)50I(4现加分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方溴酚蓝.0110I(1%溴酚蓝ili水定容到10,分装成10小管，20度冰箱保存平衡缓冲液母液尿素6M3gS(2%)2ris-I(pH.8)0.37525mI(1.5M)甘油(0%)0IillQ水定容到10m,分装10管，20度保存胶条平衡缓冲液充分混匀，用时现配)胶条平衡缓冲液母液1mIDTg胶条平衡缓冲液II(充分混匀，用时现配胶条平衡缓冲母液10mI碘乙

16、酰胺0.25g低熔点琼脂糖封闭液低熔点琼脂糖0.%0.gTrs(25m0.30甘氨酸(2m.4gDS(0.1%1mI(10%D溴酚蓝0.0010I(1溴酚蓝MilliQ水定容到00mI,加热溶解至澄清，室温保存六)同位素实验相关试剂BERreationbuer1,分装于-2度)分子量配1l母液称取终浓度Hpes-H(pH78)28.31M称.381g0.4mI40mMKCI741.4称1043705I70MDTT15.251M称542101mMETA2Na32.231M称3.2g5I0.5mMMCIH2O233014M称2.462g5I7mMATP0mM0.2m2mMdHO.85m2Xlase

17、actvtbufe终浓度母液配10ml取epes(pH7.5mMM06mlCl60mM1M0.mlMCI26H2O1mMM016mlDT21M0.0mBS0/mlmg分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方ddH2O至0m2XAnnealigbferrisHCI(H5-8.02mNaCI100mEDA2mM2X同位素反响bffer(poyeraebta聚合反响)终浓度母液1mlril10Mp8.01MMgCI2HO2MM0.2mTM1M0.04mlaCl0mMM.4ml甘油20%2dH2O至10ml2XAPE1活力鉴定bffer终浓度母液配10m100mM1M1mlTlsH

18、Cp80)KCl6M1M0.mMgCl2H2O101M0.ml甘油20%2l2O至10ml同位素电泳上样buffr(2X)ml)终浓度取甲酰胺染料90%9mETANa23m11.69gX0-溴酚蓝1kd0.02%0.g二甲苯蓝.02%0.2g0XTBEbuffeTri0.969g硼酸(pH8.3)0.8M3.757gNETA20mM1.86115g1%DenaureDNAPAEe(00l)10TBE15ml40,19:1glstck37.mlddH2OlUre48g存放在4度，使用前加200l0%AP和20lEED分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方%nuedDAGEg

19、el10TBEml0,19：1gelstock50mlddO35mlUea(尿素)48g存放于4度,使用前取35ml混合液加140l10%P和140TEMED硼氢化钠(1M7.83粉末07566g2O10mdRPbfe(分装保存于负20度)分子量母液终浓度配10mHepes(pH7.53.311100M1mlgCl26H2O3.31M20M.mlKC4.5140m0.4mDTT54514m0.04ld2O8.3mlDNAinngbufe终浓度母液分子量配250ml50mM1M12.5Tris-IpH8)00mM58.314625gMgCl26H2O0033.5gGlcrl1%25mNP-0.0

20、.25ml分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (七)酶切打质谱相关配方N4HC3(7.06)100mM粉末0.76gdd2O定容到10l，78-.0DTT(154.25)粉末0.1542gddH21lIAA碘乙酰胺,1.96)200m粉末0.3992g2O1ml八其他配方分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方2HES缓冲液(潘教师给的配方做细胞转染,需要调pH为7.5，用0.22M滤菌，分装存于20度。分子量终浓度称取NaCI580mM.6gK4.5510M0074gNa2HP41.961.5M.02g葡萄糖10.0612m0.1gEPE2385

21、0M.19gdH20定容到80mlCaCI22H2O2M)147.02潘教师给的配方做细胞转染粉末5.88gddHO20ml0.2m滤菌,分装存于20度5XT(L体系)在利用flagtag带磁珠的抗体富集蛋白时用)TrsHCI(50m)30.5gC(750)43.7H定容至1L(调节pH为7.)MMS甲磺酸甲酯(Sgma密度为1.3g/mI,M=110.131体系：液体85ddH2O915IHochs母液：1mgm，避光存于-度工作液：母液按1:1000稀释TitonX00.%)TriX-12ldH21mHDMbffe(II)曾用于LSD1去甲基化终浓度母液配10m取Trs(pH8.51mMM

22、1mlKl10m1M1lMgCI262O1m1M.1lBSA1%0甘油5%1mldd2O.m100mml/PMF(苯甲基磺酰氟)：分成储存于-20。分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方PM粉末74g异丙醇甲醇定容到0ml【注意】PF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PS，应立即用大量水冲洗之。凡被SF污染的衣物应予丢弃。5mlL氯化钠(C):氯化钠29gdH定容到0m5%Xl(5-溴-氯3-吲哚-半乳糖苷:-gl25mg二甲基甲酰胺(DMF1l注意：用铝箔包裹装液管，储存-20。DC(焦碳酸二乙酯)处理水?加100

23、lDEP于100l水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在3温浴至少1h，然后在15p条件下高压灭菌2in,以使残余的DEPC失活。PC会与胺起反响,不可用DEC处理ris缓冲液。1ol/LCal2溶液在200l蒸馏水中溶解54gCl?6H2O,用0.22m滤器过滤除菌,分装成10ml小份储存于202.5moLCaCl2溶液在20ml蒸馏水中溶解3.5gCaCl2?62O,用022滤器过滤除菌，分装成1ml小份储存于-20。pH校准液通常称为标液，如今你买仪器一般厂家都会标配三小瓶粉末：邻苯二甲酸氢钾(H=4.00),混合磷酸盐H864,硼砂(p9.18)这需要你把它稀释,一瓶只能兑20毫升(25C)的纯净水,兑好后摇一摇直到充分溶解(三瓶要分三个瓶子装哦)NaOHM)8aOH粉末定容到00LHL2M)1L1MHL溶液定容到11L分子实验室、细胞实验室常用配方分子实验室、细胞实验室常用配方 (一WB相关试剂及常用缓冲液(-3页)(二)细胞和细菌培养基、抗生素4-页(三利用-tag从细菌中纯化蛋白配方(6-7页)(四)利用His-tg从细胞中富集蛋白配方8-9页)(五)双向电泳溶液配制(10页)六同位素实验相关试剂1-13页)(七酶切打质谱相关配方(14页八其他配方(1-16页)