有机磷实验过程.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流有机磷实验过程.精品文档.一、有机磷提取：分别测定H2O、HCl、NaOH-EDTA提取液的DTP、SRPH2O-Po:DTP：取4mL水提取液于25mL比色管中，定容至10mL，加入1.6mL 5%的过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取4mL水提取液于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比

2、色管中，按DTP、SRP测定方法测定。 HCl-Po:DTP：取0.4mL HCl提取液于25mL比色管中，定容至10mL，加入1.6mL过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取0.4mL HCl提取液于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比色管中，按DTP、SRP测定方法测定。NaOH-EDTA-Po:DTP：取2mL NaOH-EDTA提取液

3、定容至50mL,再取稀释后的4mL于25mL比色管中，定容至10mL，加入1.6mL过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取2mL NaOH-EDTA提取液定容至50mL,再取稀释后的4mL于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比色管中，按DTP、SRP测定方法测定。显色剂配制：5N硫酸 70mL浓H2SO4定容至500mL酒石酸锑钾 1.371

4、5g定溶至500mLH2O中钼酸铵 20g定溶至500mL水中0.1M抗坏血酸 1.76g定溶至100mL水中显色剂的配制（100mL）：50mL 5N H2SO4 5mL 酒石酸锑钾 15mL 钼酸铵 30mL 0.1M抗坏血酸将上面四种溶液按比例混合，一般混合好的显色剂可以保存4h。磷钼蓝比色法是在50mL样品中加入8mL配好的显色剂，显色1015min，在880nm下比色。二、酶解:H2O-Po酶水解取5mL水提取液，分别加入0.44ml的不同类型酶溶液，加入0.5ml 0.4mol/L的MgCl2溶液，0.05ml 0.68mol/L的柠檬酸钠溶液，于37条件下培养16h，（植酸酶培养

5、条件为55），取出后加入1ml 20%的SDS溶液（sigma L4509，气温较低时易凝结，使用时需加热融化）定容至10ml，加入1.6ml显色剂880nm显色测定正磷酸盐量。标线：取1mg/L的磷标液 0、0.2、0.5、1、2、3、5ml，与水提取液酶解同步进行。APase溶液：称取2.5mg碱性磷酸酶用Tris9.0定容至10ml，此时碱性磷酸酶活性为7U/ml，再取1.4285ml即可配制出活性为1U/ml的碱性磷酸酶使用液。APase+PDEase：称取10mg二酯酶和1.4285ml活性为7U/ml的碱性磷酸酶溶液，用Tris9.0定容至10ml。Phytase溶液：取120mg

6、植酸酶定溶于10ml的10mM的HAc-NaAc（PH5.15）缓冲溶液中，转移至透析管中（MWCo：3500-5000，spectum laburationes.Inc,10ml），悬浮于装有2L 10mM的HAc（0.16ml至1L）-NaAc(0.59g至1L)缓冲溶液的烧杯中透析，每隔3小时更换烧杯中透析液一次，连续更换5次，透析后的酶溶液于10000r/min离心10min。植酸酶在4条件下只能保存一周。使用Tris7.0配制成活性为0.06U/ml的酶溶液使用。取1.6667ml透析后的植酸酶溶液（活性为0.36U/ml）用Tris7.0定容至10ml。APase+PDEase+

7、Phytase溶液：分别取1.4285ml碱性磷酸酶溶液（7U/ml），10mg二酯酶、1.6667ml植酸酶（0.36U/ml）用Tris7.0定容至10ml。NaOH-EDTA-Po酶水解取4mL NaOH-EDTA提取液定容至100mL，PH值调为7.0（植酸酶为5.15），取2mL定容至5mL，分别加入0.44ml的不同类型酶溶液，加入0.5ml 0.4mol/L的MgCl2溶液，于37条件下培养16h，（植酸酶培养条件为55），取出后加入1ml 20%的SDS溶液（sigma L4509）定容至10ml，加入1.6ml显色剂显色测定正磷酸盐量。酶溶液配制方法及标线设置与水提取液一致。三、核磁取40ml NaOH-EDTA-Po冷冻干燥至粉末状，加入 1mL 去离子水溶解，不断用手摇晃并使用超声波振荡，至样品粉末完全被再次溶解，浓缩后溶液于低温下冷冻储存直到分析。