血片的制作和染色精讲学习PPT教案.pptx

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1、血片制作和染色 人体疟原虫的基本结构细胞浆 随虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。红或紫红色。人体疟原虫的基本结构设 备载玻片 新玻片 把玻片浸入有液态洗涤剂清水中1020分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再放入盛有清水的容器中换水34次，凉干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。用于特殊目的玻片，上述处理后将玻片浸在95乙醇510分钟，再擦干擦亮。 设 备旧玻片 将玻片浸泡于洗涤剂溶液中12天，或浸泡于煮沸的5肥皂水12小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中12小时，擦去玻片上的血痕，用清水漂洗34次，再将玻片擦干擦亮。 玻片包装 洗净的玻片每10

2、20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。设 备采血针 使用一次性采血针。玻片盒 为防止污染和苍蝇吸食血膜，新血片应放在玻片盒内，厚血膜要保持水平，直到充分干燥。75乙醇棉球 用于采血前后消毒。记号笔 用于记录血片号码。试 剂染色液种类 以碱基美蓝液和酸性伊红液混合的多色性染剂（美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青）配制的多色性染液分为两类：水溶液：罗氏（Romanowsky）染液、西氏（Simon)、J.S.B氏染液、费氏(Field)等；醇溶液：吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液、利氏（Leishman）等。 试 剂染色原理 伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性水溶性盐酸

3、盐，当它们各自溶化水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质（如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等）可结合成不易溶于水的沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的阴离子，美兰与疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。试 剂 吉氏（Giemsas）染液配制 吉氏粉 5.0 g 甲醇 250ml 甘油 250ml 将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至加完甘油倒入500ml有塞玻璃瓶。在研钵中加入少量甲醇洗掉剩余部分倒入瓶内，再加甲醇洗静研钵中甘油。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使

4、用。试 剂 瑞氏（Wrights）染液配制 瑞氏染剂粉 1.0 g 甲醇 500ml 甘油 15ml 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用甲醇洗研钵中的甘油，溶液倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。试 剂染色用水 常用的染液稀释和冲洗用水是中性蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。在没有蒸馏水时，也可用井水、河水、泉水或雨水。稀释和冲洗用水的pH值在7.0-7.2染色效果最佳。也可选用临时配制的PBS缓冲液，作为稀释和冲洗用水。试 剂PBS缓冲液配制（0.01 mol/l PBS pH7.2）KH2PO4 0.38gNaHPO4 1.02g(或Na2

5、HPO4 12H2O 2.58g)NaCl 8.00g蒸馏水加至 1 000ml血片制作取血时机 现症病人随时取血，疟疾普查不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，应掌握适宜的取血时机。一般患者发作数小时至十小时内，可见环状体, ,12123636小时发育至滋养体，36 36 4848小时可见裂殖体，发作二次可见配子体。恶性疟原虫裂体生殖在内脏毛细血管内进行，发作前末稍血液中不易查到。较理想的取血时间是在发作后2020小时左右，初发患者退热后常查不到原虫。采血部位和方法通常耳垂取血，先用75%75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入皮

6、肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜用右手大拇指和食指夹持推片两侧中部，用推片左下角从取血部位刮取约45l血，使血滴与载玻片接触再由里向外一个方向旋转24圈，涂成直径0.81圆形厚血膜。薄血膜用推片中部取血11.5l，将推片与载玻片2535度角接触，当血液在两侧扩展至约2 宽时，迅速向前推成长2.5 2.5 舌状薄血膜。厚、薄血膜的位置厚薄血膜标本片厚血膜血量适宜，不宜过多或过少。薄血膜无皱折和空泡，红细胞单层排列。染 色吉氏染色 先用甲醇固定薄血膜。成批染色时，将血膜朝一方向插入染色缸中，倒入新配制2吉氏染液浸没厚薄血膜染色30分钟，向染色缸中缓慢注入自来水至溢出，将染色缸

7、中残余染液倾出，再加入新水反复冲洗23次，然后取出血片，将血膜朝下插在晾片板上晾干。单张血膜染色 可取蒸馏水或PBS缓冲液2ml加入吉氏染液12滴，混匀后滴在厚薄血膜上染色20 30分钟，再按上述方法水洗、晾干。快 染 配制5%5%吉氏染液 在2ml2ml缓冲液或净水中直接滴加吉氏原液7 7滴，混匀，滴到待染标本的厚薄血膜上，染色10min10min，清水缓慢冲洗，晾干镜检。影响染色效果的因素血片 玻片清洁，血膜制作质量。染剂和溶剂 染料溶剂质量影响染液酸碱度。染液 新配制染液染色力较弱且常呈碱性。染液浓度 染液浓度高，着色快，着色深；浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清晰。染色时间

8、 温度高，着色快，染色时间短；温度低，着色慢，染色时间适当延长。影响染色效果的因素稀释和冲洗用水P PH H值 稀释和冲洗用水P PH H偏低，染色偏红；P PH H偏高，染色偏蓝。冲洗方法 染色后将玻片连同染液一起放在水中缓慢漂洗，或沿玻片及染色缸边缘缓慢加水，使染液表层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。染色效果的判定 染色着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈兰色或淡蓝色，白细胞核呈紫蓝色，疟原虫核呈红色。血片制作染色注意事项1.1.编号 血膜制成后用蜡笔在玻片上写受检者号码，待薄血膜干后用铅笔于薄血膜上写受检者的号码。2.推片 制血片时

9、手指持玻片边缘，不接触玻片表面。用作推片的玻片边缘要平滑。3.新血片存放 刚涂制的血膜平放在标本盒内，防尘、防苍蝇、蟑螂吮吸血膜，血膜干后盖严标本盒。新木制标本盒不能马上存放标本，以免厚血膜血红蛋白被木醇固定。血片制作染色注意事项4.4.未染色血片存放 血膜自然干透后用甲醇固定薄血膜。夏天标本24244848小时固定染色；冬天不超过7272小时。若不能及时染色，薄血膜先用甲醇固定（1 13 3分钟），然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温1 12 2小时后取出血片染色。 把未经固定血片置于有氯化钙的干燥器内，放入冰箱可保存3 3年。试 剂染

10、色用水 常用的染液稀释和冲洗用水是中性蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。在没有蒸馏水时，也可用井水、河水、泉水或雨水。稀释和冲洗用水的pH值在7.0-7.2染色效果最佳。也可选用临时配制的PBS缓冲液，作为稀释和冲洗用水。厚、薄血膜的位置厚薄血膜标本片厚血膜血量适宜，不宜过多或过少。薄血膜无皱折和空泡，红细胞单层排列。快 染 配制5%5%吉氏染液 在2ml2ml缓冲液或净水中直接滴加吉氏原液7 7滴，混匀，滴到待染标本的厚薄血膜上，染色10min10min，清水缓慢冲洗，晾干镜检。染色效果的判定 染色着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈兰色或淡蓝色，白细胞核呈紫蓝色，疟原虫核呈红色。血片制作染色注意事项4.4.未染色血片存放 血膜自然干透后用甲醇固定薄血膜。夏天标本24244848小时固定染色；冬天不超过7272小时。若不能及时染色，薄血膜先用甲醇固定（1 13 3分钟），然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温1 12 2小时后取出血片染色。 把未经固定血片置于有氯化钙的干燥器内，放入冰箱可保存3 3年。