HCVRIBA中文说明书.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流HCVRIBA中文说明书.精品文档.编码抗原（重组蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRON RIBA HCV3.0 SIA针对人血清或血浆中丙肝病毒抗体（anti-HCV）的条带免疫印迹试验（SIA）适用于体外诊断编码抗原（重组蛋白C33C,NS5；合成多肽5-1-1，C100,C22）的丙肝病毒CHIRON RIBA HCV3.0 SIA针对人血清或血浆中丙肝病毒抗体（anti-HCV）的条带免疫印迹试验（SIA）适用于体外诊断产品编号 930600目录 页码命名和使用目的 2试验概述和说明 2试验

2、的生化原理 3试剂 4警告 4试剂制备 6储存说明 7试剂变质指示 8样本收集和准备 8程序 9提供材料(30人份试剂盒；产品编号930600) 9 需要但不供给的材料9 主要陈述9 试验程序9质量控制程序11结果解释11程序的局限性12预期结果13具体的性能特征17关键符号19参考文献20发行日期：2007-12诺华疫苗和诊断试剂公司100125121. 命名和使用目的 CHIRON RIBA HCV3.0 SIA是一种针对人血清或血浆（来自为输血或血液再造的捐赠者）中丙肝病毒编码的单个蛋白所对应的抗体的体外定性酶免印迹测定，它主要是一种对经类似ELISA等许可的抗HCV筛选步骤重复筛查的活

3、性人血清或血浆样本进行辅助的，更具体的测试手段。2. 测定概述和说明 正如Ebeling等人所描述的，条带免疫印迹测试（SIA）已经在阐明丙肝对应的单个抗体方面展示出用性，通过SIA法对抗HCV的检测是基于传统的Western-blotting技术，在这项技术中，HCV基因组编码的特异性抗原被固定在一个膜支持物上。因HCV编码的单个蛋白而产生的抗HCV活性的可视化是通过使用酶标记的抗人IgG对酶底物的比色实现的。CHIRON RIBA HCV3.0 SIA是一种体外定性免疫印迹测定，它把重组HCV编码抗原和合成HCV编码多肽分别固定在测试条带上。两个重组抗原（C33C和NS5）及两个合成多肽（

4、C100P和5-1-1P）是源于推测的病毒非结构蛋白，然而第三个多肽(C22P)被推测对应于病毒的核衣壳蛋白，由于重组HCV C33C和NS5抗原是以一种和人源过氧化物岐化酶(hSOD)融合表达的形成得到的重组蛋白，所以hSOD也被单独表达作为条带上的对照带。这个对照条带可以排除重组蛋白中本不属于HCV本身编码的hSOD部分所对应的抗体。HCV C33C抗原产生于大肠杆菌（E.coli）基因重组表达，而HCV NS5抗原和hSOD产生于酿酒酵母（S.serevisiae）体系的基因表达。把基于早期重组抗原的RIBA HCV SIA结果值作为单抗原或多抗原的抗HCV筛选试验的补充实验已经出现在多

5、篇已发表的论文当中。然而，已通过多抗原筛选步骤重复验证为部分活性样本却在RIBA HCV 2.0 SIA 试验中成了不确定样本。（推测的包含HCV抗原的HCV基因组定位如图一所示）据报道，非A,非B（NANB）肝炎占据输血后肝炎的80-90%，这类肝炎最显著的特点是半数的感染病人会发展成慢性肝炎，其中的20%又有可能进一步发展成肝硬化。接种过慢性NANB肝炎病人血清的黑猩猩会通过连续的病毒渠道传染到其它黑猩猩体内，这个实验证实了可转移的NANB媒介的存在。一个NANB肝炎的严格定义指除甲肝，乙肝，delta肝炎，巨细胞病毒感染和Epstein-Barr病毒感染，以及其它原因的肝脏发炎等之外的肝

6、炎。一般NANB感染是温和的，病例中的75%是无黄疽的，病例中病症温和的比例甚至更高。但是NANB肝炎也具爆发性。Mathiesen等已经揭示出所有爆发性肝炎病例中，36%被诊断为NANB感染者。NANB肝炎媒介的基因组已经从带有高滴度媒介的受感染的黑猩猩血浆中被克隆得到，这个媒介已经被指定为丙肝病毒。重组的HCV编码蛋白已经被利用发展为检测人血清和血浆中抗HCV的第一代（单抗原）和第二代（多抗原）检测筛选测定。具有显著特征的NANB panel数据表明了HCV抗体与输血后和社区型获得NANB肝炎间的具体关系。RIBA HCV 3.0 SIA，when used as directed in

7、this insert，可以检测人血清或血浆中HCV的抗体。呈现在测试纸带上的单个的抗原带可以确认抗特异的假定病毒抗原的抗体活性。3. 测试的生化原理 RIBA HCV 3.0 SIA是一个利用固定在测试条带上的重组HCV抗原或合成多肽形成的单一带进行的三步试验。第一步，样本和试验对照被稀释并于条带上孵育。假若有的话，那么其中的特异的HCV抗体将结合到对应的重组抗原或者合成多肽条带位置。血清或血浆中未结合组分通过抽吸和冲洗被去除掉。第二步，条带被孵育在含过氧化物酶标记的抗人IgG结合物中，这个结合物被结合到抗原抗体复合物的人IgG部位，未结合的结合物的去处通过倾倒和清洗步骤来完成。第三步，包含

8、有过氧化氢和4-氯-1-萘酚的可借酶进行反应底物显色系统被加入，如果结合物是存在的，那么在特异性的抗原，多肽或者对照带位置，酶促反应后将产生一种可溶性的蓝黑背景的产物，显色反应与过氧化氢对过氧化物酶的二价氧化有关，接着氧化状态的过氧化物酶分别靠两个共价键与4-氯-1-萘酚反应而恢复到正常状态，并导致产生可溶性的蓝黑色的反应产物。条带上的颜色产生以后，反应通过反应物的去除和洗涤而终止。肉眼可见的出现在条带上的带型是结合在条带上单个重组抗原或合成多肽所对应抗体的直接反映，对应每个抗原带的样本活性通过肉眼对条带上的低浓度的IgG和高浓度的IgG产生的隐性和阳性对照而被确定。如图三所示。4试剂 RIB

9、A HCV 3.0 SIA 是一个30人份试剂盒（产品编号930600）组分描述供量STRIPHCV编码抗原（重组C33C和NS5抗原，合成的C5-1-1,C100,C22多肽）覆盖的条带：每个条带包含4个HCV编码抗原/多肽带，1个重组人SOD带，2条IgG对照带30个连续号的条带：提供在6个密闭袋中；每个袋中含有5个条带，并各自被置于软管中SD样本稀释液：带有牛蛋白稳定剂和去污剂的磷酸盐缓冲液（PBS）。包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含100ml溶液的瓶子CON结合物：过氧化酶标记的抗人IgG（重链和轻链），含有牛蛋白稳定剂，含有0.01%硫汞撒作为防腐剂含65

10、ml溶液的瓶子4CN底物溶液：4-氯-1-萘酚的甲醇溶液含12ml溶液的瓶子SB底物缓冲液：过氧化氢的磷酸缓冲液含60ml溶液的瓶子WB洗液浓度(50): 含有0.01%硫汞撒防腐剂的和去污剂的磷酸缓冲液含80ml溶液的瓶子PC阳性对照（人源）：灭活的包含有抗HCV抗体的人血清或血浆；并通过FDA认证实验测试对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活性，包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含0.3ml溶液的小瓶NC阴性对照（人源）：经FDA认证实验测试对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活

11、性的人血清或血浆，包含有0.1%叠氮化钠和0.05%庆大霉素硫酸盐作为防腐剂含0.3ml溶液的小瓶注意：所有样本要当做含有可传染性的媒介成分进行处理。储存在2-8（不要冰冻）针对体外诊断使用CHIRON RIBA HCV3.0 SIA满足FDA要求5.提醒 1.所有实验样本要当做含有可传染性的媒介成分进行处理。产生阳性对照物的血清或者血浆被处理以灭活其中的丙肝病毒。另外，使用的血清或者血浆要通过FDA认证实验测试验证对HbsAg,抗HIV-1,抗HIV-2，抗HTLV-1和HTLV-2抗体无反应活性。然而，还没有哪种灭活过程或者试验方法可以完全保证来自人血液的产物不会转移感染性媒介。因此，这些

12、成分必须当做具备转染性媒介进行操作。建议所有试剂和样本均按已确立的最佳实验室操作规程进行操作。2.不要用嘴吸液。3.不要在操作过样本或试剂盒的地方吃喝，抽烟，或者使用化妆品。4.测试过程中戴一次性手套，之后要彻底洗手。手套要作为医疗垃圾丢弃。5.对溅液要迅速地用0.5%次氯酸钠溶液进行消毒（利用家用消毒剂1：10稀释）或者等效其它消毒剂。污染物体应该被视为医疗垃圾丢弃。6.任何潜在的污染物，包括阴阳对照，人样本以及相关与之接触过的物体都应该按照当地废弃物处理要求被处理并作为医疗垃圾丢弃。遵照当地废弃物处理要求，包括试验中的抽吸液在内的液体医疗垃圾应该在排放到下水道之前用0.5%次氯酸钠进行消毒

13、。（家用消毒剂按1:10体积比进行稀释）7.包含甲醇和硫汞撒组分的试剂盒组分以及含有该类物质的废液可能潜在的被分类为医疗垃圾。因此，因此它们也应该参照当地废弃物处理要求被丢弃。8.阴性和阳性对照以及稀释的样本都含有防腐剂叠氮化钠，叠氮化钠已经被报道会和铅及铜探测器潜在的形成爆炸性的金属叠氮化物。因此，不要使用金属管物作为实验室容器，同时要一直冲洗足够体积的水以金属的叠氮化物堆积在探测系统。9.避免眼睛，皮肤或者衣物与底物溶液（4-氯-1-萘酚）接触。假如底物溶液与眼睛或者皮肤有接触的话，应彻底用水冲洗。警告：底物溶液中的4-氯-1-萘酚是一种危险物质，所以它的弃除应按当地规章制度进行。警告：底

14、物溶液包含甲醇。高度易燃。吸入吞咽的话有毒。应保持容器紧紧密闭。远离燃源。不要抽烟。避免与皮肤接触。万一有意外发生，或者身感不适，应立即寻找医疗帮助。（可以的话要标上瓶签）10.使用之前，要把所有的试剂盒试剂成分和样本置于室温（15-30）大约30分钟，不使用的试剂要放回到2-8.11.不同试剂盒间的试剂（试剂盒组分）和/或和条带不要交叉使用。不同生产批号的试剂盒组分和条带禁止一起使用。12.不要替换用于试剂盒中的阴性阳性对照。13.不要剪条带。更窄的条带可能导致错判。任何针对条带上的的人为操作都可能会出错或者可能阻止道反应带的识别。14.超过有效期后不要再使用该试剂盒。具体日期被印刷在试剂盒

15、盒体上。15.测试条带和试验软管只能使用一次。一旦已经用于试验不要再使用测试条带和软管。16.不要交换小瓶或瓶子的塞子和盖子；否则会导致试剂的交叉污染。17.条带操作过程中不允许条带干掉。（试验全部18个步骤步骤中5个步骤）18.为防止褪色，保持操作过程中的条带避光（例如，阳光直射）和避热（高于30）。19.试验过程中禁止有氯消毒剂容器或者其它源头中的次氯酸钠蒸汽接触到条带，因为颜色反应可能会因此终止。20.温和处理条带。整个操作过程戴手套并使用镊子以防止对条带的污染。21.工作洗液要用蒸馏水或去离子水。临床实验室试剂用水，型或型也可以被使用。储水和洗液都应该在非金属容器中。22.试验之前要确

16、保工作洗液和工作底物都是足够的。假如发现试验操作当中上述溶液是不够的话，试验操作将是无效的，需要在再次准备好工作溶液后重复进行。23.所有的移液设备均应按照厂商提供的说明书仔细校准过。24.对每个样本要使用单个枪头，以防止交叉污染。25.最大操作次数是30次。每步操作均应按照指定过程完成，不许有中断。26.每个试验过程都要含有阴性阳性对照。整个试验过程阴阳性对照要像病人/捐献者样本一样进行操作（详见第10部分）27.试验过程中要没按指定的那样加等份样本的话，无论最初的样本是阴性还是阳性，都将会导致样本条带被解释为阴性。28不遵照说明书的操作将会导致一个错误的试验结果。29.参照欧洲委员会指令1

17、999/45/EC和ISO 15223：2000标准，试剂盒中的一些试剂带有危险和安全标志并应该相应的进行处理。30.已经要求，我们可以提供材料的安全数据单。A以下试剂包含甲醇：底物R11 高度易燃R23 吸入有毒R25 吞食有毒S7 保持容器密闭S16 远离火源-禁止吸烟S24 避免皮肤接触S45 万一有意外或身体不适，请立即寻找医疗帮助（在允许的地方示以标签）B 下列试剂有生物危险阳性对照（人）阴性对照（人）6.试剂的准备 使用之前，所有的试剂应在室温（15-30）中恢复温度，并通过温和颠倒容器数次以彻底混匀试剂，避免产生气泡。程序1.工作洗液的准备：在一个干净的玻璃或聚丙烯容器中，按照表

18、1说明准备足够的工作洗液。室温下（15-30）工作洗液在一周内事稳定的。容器上注明工作洗液的配置时间及有效期。注意：洗液的浓储液含有去污剂。清洗过程中，残留的泡沫还会留在洗桶中，然而残留泡沫的存在不会影响到实验结果。表1：工作洗液准备各种不同数量的条带所需试剂量条带数量浓储液体积稀释所用水+的体积3-512ml588ml6-1013ml637ml11-2015ml735ml21-3017ml833ml+:蒸馏水或去离子水2.工作底物的准备：在一个干净的玻璃或者聚丙烯容器中，参照表2说明为试验准备足够的工作底物（每个样本最少1ml,每个洗涤容器最少10ml,一个洗涤容器可以放置20个条带）。工作

19、底物可以在使用前一个小时内准备；并置于黑暗环境中。任何未使用的工作底物不能被存储为后续试验用。底物中4-氯-1-萘酚是一种危险物质必须根据当地规章制度予以丢弃。记录容器中工作底物的配置日期和准确时间以及有效期时间。表2：工作底物准备各种不同数量的条带所需试剂量条带数量底物溶液的体积底物缓冲液体积3-101.7ml8.5ml111.9ml9.5ml122.1ml10.5ml132.2ml11.0ml142.4ml12.0ml152.6ml13.0ml162.7ml13.5ml172.9ml14.5ml183.1ml15.5ml193.2ml16.0ml20+3.4ml17.0ml+:每个洗涤容器

20、能盛放的最大量7.储存说明 1.储存试剂盒或者单份试剂（如试剂盒组分）于2-8.不能冰冻。2.不要使用过期的试剂盒或者单个试剂，具体日期被印刷在试剂盒上以及单个试剂组分的标签上。3.打开小袋后条带应该在两周内被使用。不使用的条带应该被放置于原先的软管中，并重新封闭在内含干燥剂的锡纸袋，置于2-8保存。在小袋上记录好开袋及条带的有效期。4.室温下（15-30）工作洗液一周内是稳定的。5.工作底物当处于黑暗环境中时，室温（15-30）下1小时内稳定。8.试剂变质迹象 1.包被好的条带被密封在带有湿度指示干燥剂的保护性小袋中，假如有过多的水分进入小袋的话，正常状态下是蓝的或者紫色的干燥剂将会变成粉红

21、色。如果干燥剂是粉红色的，这个条带将不能再使用。2.底物溶液应该是无色的。如果它呈现黄色，那么它已经被氧化，不能再被使用。3.使用试剂物理表观上的改变预示着这些物质的变质。假若这个的现象（如颜色上的改变或者带有微生物污染的浊度上的改变）被观察到的话，它们不能再被使用。9.样本收集和准备工作 样本收集前对病人或者捐赠者没有具体的准备工作，然而，利用RIBA HCV 3.0 SIA试验的样本收集要遵循以下原则：1.血液采集应该通过良好的医疗技术。2.使用的样本要在56条件下热处理1小时。3.血清或血浆可以在2-8储存一周。为防止可能的污染，库存的样本（如储存时间超过一周的）应该被储存至冰冻（-20

22、甚至更低）。样本不要反复冻融。冰冻的样本应该首先被彻底融化（室温），然后充分混匀。如果有必要去掉其中的肉眼可见的颗粒成分，要进行离心。测试之前，样本要恢复至室温。避免样本的反复冻融。4.应该首选干净的，非溶血的样本，有沉淀的样本要通过离心去除。5.经过测试，以下物质对阴性和阳性样本的反应活性没有影响：血红蛋白（高至80mg/dl），甘油三酯（高达1600 mg/dl），胆红素（高达60 mg/dl）。多达五次的反复冻融或者spiked和白色念珠菌，葡萄球菌表皮菌素，假单胞杆菌铜绿菌素（最终浓度都达10 3CFU/mL）于2-8 放置八天都对抗HCV阴性和阳性样本反应活性没有影响。6.经较好医疗

23、技术采集的血清（被收集在血清分离管或者真空样本收集管）或者血浆，含有EDTA的钾盐（15%），肝素的钠盐，ACD（B溶液），CPDA-1，或者4%柠檬酸钠可以被使用。为了确证样本抗凝剂的准确比例，被抽进真空管的样本应该被评估for fill adequacy基于NCCLS标准或者血液试管制造商的说明书。7.针对如下样本，例如尸体的体液（包括血清和血浆），胸积液，唾液，尿液，或者非人类样本还没有经过试验评价，所以不应该被采用。8.所有的血液样本应该被视作含有可转染媒介存在而操作。推荐所有的血液或血液组分操作应于OSHA血源病原体标准一致。如果样本要被运输，它们必须遵照联邦章程针对运输材料和运输模

24、式标以“诊断样本”“感染物质”/“病原介质”字样进行包裹。在一个周围温度为30甚至更低的条件下样本可以被运输6天，2-8冰冷条件下可以运输七天，也可以干冰环境中运输。避免样本的反复冻融。到达实验室以后，在周围温度环境中或者2-8环境中运输的样本，假如它们在一周内被测试，所有样本可以放置2-8保存。被干冰环境运输的样本应该在一个-20甚至更低的不用除冰的冷藏库中保存，直至它们被用去测试。10.步骤 A.提供的材料（30人份，产品编号930600）每个CHIRON RIBA HCV3.0 SIA试剂盒包含有以下成分STRIP30个条带6个袋子SD1瓶100mlCON1瓶65ml4CN1瓶12mlS

25、B1瓶60mlWB1瓶80mlPC1小瓶0.3mlNC1小瓶0.3ml带盖洗涤容器-每盒两个每个试剂盒包含一个最多可以操作6次的足够量的试剂。（见第4部分，对每个提供的试剂都有一个完整的描述）B.需要但不提供的材料1.摇床（可分量混合器）：能够维持一个倾斜度在20度-30度之间的每分钟16-20循环摇速。2.能够维持1105 rpm转速的旋转摇床。3.为准备工作洗液缓冲液以洗涤条带的蒸馏水或去离子水。4.一次性手套。5.确定的或校准过的能够移去20ul和1000ul的移液装置，且精密性达到至少5%。6.干净的玻璃或者聚丙烯带有刻度的量筒（10ml,25ml,50ml,100ml）.7.血清学的

26、移液管（5ml或者10ml）。8.为处理条带的金属或者塑料镊子。9.抽气装置和维持抽气状态的空间。试验中的抽出物潜在的具有感染性，丢弃前应该被消毒。液体的次氯酸钠（例如家用消毒剂）被1：10稀释在抽出物中，或者等价的其它消毒剂也可以在丢弃前对抽出物进行消毒。10.试验管架和洗涤容器（RIBA 启动试剂盒，强生临床诊断公司，产品编号930590）。每个洗涤容器最多可容20个条带。C.主要陈述1.最大的操作数量是30个条带（包括阴阳性对照条带）；最少的操作数量是3个条带（包含有阴阳性对照条带）。每个试剂盒包含一个可操作6次的足够量的试剂。每次操作必须顺利进行，不能有中断，正如测验步骤中指明的那样。

27、2.对每一系列的病人或者捐赠者样本，要测试阴性阳性对照。和病人或捐赠者样本一样要准确的处理阴阳性对照。3.在试验步骤中使用试剂前，要确认已经准备好工作洗液和工作底物的量充足，如果测试过程中发现上述量不足，那么试验操作被认为是无效的，需要再次准备试剂重复进行。4.为防止褪色，保持操作过程中的条带避光（例如，阳光直射）和避热（高于30）。5.伴随着试验步骤的完成，要对洗涤容器用三倍体积的蒸馏水或去离子水进行洗涤。使用六次后洗涤容器可以弃掉。D.试验步骤1.开始测试之前大约三十分钟，从2-8拿出试剂盒，并允许试剂盒成分恢复室温（15-30）。使用前请温和摇转容器数次以彻底混匀试剂。避免气泡产生。2.

28、如果还没有准备，那么请准备工作洗液（见第6部分中表1，试剂准备部分）3.从密封的锡袋中取出所需数量的条带，并放置于各自软管的试验软管支架上。一个样本软管和阴阳性试剂盒对照软管是必需的。注意：样本被测试时，试剂盒供给的阴阳性对照每次必须被包含。开袋后，条带必须在两周内被使用。不用的条带应该于原先软管中2-8放置，并处于含有干燥剂的密闭锡袋中。使用胶带去封闭小袋，并在小袋标签上记录小袋被打开的日期和小袋的使用期限。4.根据样本确认数量确定条带使用的数量。5.移去软管的盖子，并在每个软管中加1ml样本稀释液（确保整个条带被液体覆盖）。6.加20ul的适量样本或者对照到对应标记的软管中。盖上软管的盖子

29、并颠倒混匀。注意：对每份样本或者对照要使用移液器7.请把软管架在摇床上（见图2），并用橡胶带或胶带系紧；室温下（15-30）摇动（每分钟16-20转）4-4.5小时。记录好样本孵育步骤的起始时间和终止时间。注意：摇床介导的稀释的样本或者对照与条带的反应对达到试验的最佳性能是非常重要的。整个孵育过程中定期检查以确保摇床运动是否持续。可能影响到抗体结合的摇床不正确运行将使测试结果无效而且需要重复进行试验。8.打开软管的盖子并完全吸出液体到一个合适的废液容器中（见第5部分，第6项的警告）。每个软管中加1ml的样本稀释液。9.盖上软管，并把软管支架放到摇床上，室温（15-30）摇动30-35分钟，然后

30、再次吸出液体。10.加1 ml工作洗液（见表1）到每个软管中，然后倒液体和条带到含有10ml工作洗液的洗涤容器中（每个洗涤容器最多20个条带）。如果操作数量少于20个条带，再加工作洗液以补足到30ml。旋转洗涤容器中的条带。11.再加30ml的工作洗液（总共60ml），然后倾倒洗液，并确保条带仍留在洗涤容器中。为了留下条带，倾倒时一般温和地滚动洗涤容器。12.加30ml工作洗液，旋转，再加30ml工作洗液，然后倾倒洗液并如步骤11描述的那样确保条带仍留在洗涤容器中。13.洗涤容器中的每个条带要加1ml结合物（一个洗涤容器最少10ml）。14.室温条件下（15-30）在一个转速为1105rpm的

31、旋转摇床上旋转洗涤容器9-11分钟。注意：偶尔要检查和摇动洗涤容器以防止条带聚集堆叠。摇床的循环运动对试验的成功是关键的。15.准备工作底物（第6部分，表2，试剂的准备部分）。16.结合物孵育完成后，倾倒结合物。用30ml的工作洗涤液洗条带，旋转，并再加30ml工作洗液。倾倒洗液并再重复该操作两次。17.洗涤容器中每个条带加1ml的工作底物（一个洗涤容器最少10ml）。18.室温条件下（15-30）在一个转速为1105rpm的旋转摇床上旋转洗涤容器15-20分钟。19.倾倒工作底物，然后通过加60ml的蒸馏水或去离子水旋转洗涤条带。倒去洗液并再重复该操作一遍。为了留住条带，倾倒时一般温和地滚动

32、洗涤容器。20.使用镊子，转移条带到一个吸水纸上以吸取多余水分。室温条件下黑暗空气中干燥条带至少30分钟。3个小时内解释条带（见第12部分，结果解释）。注意：为防止褪色，保持操作过程中的条带避光（例如，阳光直射）和避热（高于30）。11.质量控制程序 试剂盒中的试验对照每次操作都必须被包括，无论测试的样本数或条带数是多少。注意：一个试剂盒的阴性阳性对照需要每次操作时都包括在内，但如果操作中不只一个洗涤容器的话话，没必要每个洗涤容器中都要阴阳性对照。被覆盖在条带上的抗原确认和定位如图3所示。每个条带上的两种水平的人IgG（水平，低浓度对照；水平，高浓度对照）被作为内部对照。通过和水平，水平人Ig

33、G内部对照条带对照，个体HCV反应活性被确定。详见第12部分对结果解释的描述。针对试剂盒的阴阳性对照，以下结果被期望得到：a.在阴性和阳性对照条带上，内部IgG对照水平和水平对应条带必须是通过肉眼可以清晰的辨别的。而且IgG对照水平必须是明显更浅的比IgG对照水平。b.相对所有的HCV条带，阳性对照条带必须是2+甚至更高的阳性（参看结果解释部分）。hSOD对应的条带必须是视觉上更浅的相对IgG对照水平来说（如-或者+/-）。c.阴性对照条带必须对每个HCV和肉眼判断要浅于IgG对照水平的hSOD条带展示一个对应。（如-或者+/-）如果试剂盒对照不能满足以上标准的话，这个操作就是无效的，同时应该

34、被重新进行。另外，针对所有的病人或捐赠者样本条带IgG对照水平和IgG对照水平条带必须是肉眼清晰可辨的，且IgG对照水平必须更浅相对IgG对照水平条带来说。如果这个标准不能满足某个病人或捐赠者样本，那么针对这个样本的试验必须被重复。注意：如果带型不完整，或者有任何假象干扰病人或者捐赠者样本条带解释，即使试剂盒的阴性阳性对照条带仍然是可解释的，这个样本条带同样是无效的，试验应该被重复操作。12.结果解释 样本的抗HCV活性通过比较条带上人IgG（水平，水平）的条带强度对照加以确定。抗体确认被通过HCV带上的特异条带位置而确认。如第11部分的质量控制程序的图3所示。根据内部对照IgG条带的密度，H

35、CV条带的强度被打分如下：条带强度得分无带-低于IgG对照水平的带强度+/-等同于IgG对照水平的带强度1+高于IgG对照水平的带强度，但低于IgG对照水平的带强度2+等同于IgG对照水平的带强度3+强于IgG对照水平的带强度4+阴性，不确定性，阳性解释是基于呈现在条带上的反应类型。对于有效操作，以下标准应该被用于解释：抗原带型解释没有1+或者更高强度反应活性的HCV带呈现，或者，仅仅hSOD带呈现1+或者更高强度的反应活性阴性任何单一的1+或者更高强度反应活性的HCV带呈现，或者，hSOD带呈现1+或者更高强度的反应活性，同时有一条或多条HCV带呈现1+或者更高强度的反应活性不确定性至少有两

36、条HCV带呈现1+或者更高强度的反应活性阳性在这个试验中低于IgG对照水平（例如+/-）就是低于反应活性的cutoff值。一个阳性条带解释仅仅可以在hSOD带反应活性不存在的情况下成立（例如-，+/-）。一个阳性测试结果意味着抗HCV的存在和目前或者曾经有HCV的感染。一个不确定性的结果意味着抗HCV可能或不可能出现，因此是否有HCV感染存在并不能确定。因为任何条带上病毒编码抗原的1+或者更高强度的反应活性是目前或者过去HCV感染的可能证据，所有不确定性个体应该6-12个月以后被重新测定以确认是否有反应活性增加迹象。建议六个月后使用对个体的新鲜抽取样本进行重测。经过许可的抗HCV筛选步骤呈反应

37、活性而RIBA HCV 3.0 SIA测定结果为阴性的不排除HCV感染的可能性。在感染早期，抗HCV水平可能是检测不到的。偶然情况下，条带可能有一个深色的背景。假如相对于背景IgG水平和IgG水平内部对照条带是可辨别的（例如更深于背景，且IgG水平的颜色深于IgG水平），那么这个条带是可解释的，而且带的强度同上述内部对照进行比较。条带上没有一个或者多个抗原对应抗体呈现的抗HCV阴性样本，抗原带可能会比背景颜色更浅，这样的带应该作为无反应活性解释。（例如-，+/-）13程序的局限性 为了获得最佳结果，试验必须严格按照这些说明进行。尽管丙肝病毒是已知血源NANB肝炎的首要病原介质，但是也有可能存在

38、HCV以外的其它NANB病原途径。RIBA HCV 3.0 SIA仅限于人血清或血浆中抗HCV的检测。尸体的体液（包括血清和血浆），胸积液，唾液，尿液，或者非人类样本还没有经过试验评价，所以不应该被采用。14预期结果 RIBA HCV 3.0 SIA的性能通过对低危人群，高危人群，NANBH人群的临床研究加以评价。特异性通过三种人群予以评价：（1）来自正常志愿者的血液捐赠，各自在三个血液中心收集并测定；（2）已经通过许可的多抗原筛选系统重复验证有反应活性的来自延缓血液捐赠者的库存样本；（3）来自患有肝脏疾病但为非NANBH病人个体的样本。灵敏度通过以下样本被评估：NANBH病人的样本（血清转阳

39、名单）；临床确认的NANBH病人样本；可获得HAHBH的高危人群样本，例如血友病患者，长期血透析病人以及静脉毒品注射者。所有样本分别用RIBA HCV 3.0 SIA和RIBA HCV 2.0 SIA平行测试。A.随机志愿者的捐赠血液反应活性（低危人群）B.已经通过许可的多抗原筛选系统重复验证有反应活性的来自延缓血液捐赠者的库存样本反应活性C.针对来自其它肝脏疾病患者或者含有高水平免疫球蛋白的个体样本的特异性研究。D.血清转阳患者的灵敏度。E.急性或慢性NANBH病人的灵敏度。F.高危人群的灵敏度。15.具体的性能特征 A.潜在的干扰物质和条件使用抗HCV阳性样本和阴性样本通过RIBA HCV

40、 3.0 SIA对较高水平的甘油三酯，胆红素，血红蛋白影响进行评估。使用白色念珠菌，产表皮菌素葡萄球菌，产铜绿菌素假单胞杆菌（最终浓度都达10 3CFU/mL）最为微生物污染菌的影响也分别在第三天，第八天被测评。多次反复冻融和热灭活的影响也被测评。结果见表11.试验结果可在所有测试条件下类推。表11：潜在的物质和条件对RIBA HCV 3.0 SIA影响材料或者条件干扰水平或条件描述影响甘油三酯1600mg/dl无影响胆红素60 mg/dl无影响血红蛋白80 mg/dl无影响微生物污染10 3CFU/mL,8天无影响反复冻融5个循环无影响热灭活56，1小时无影响抗酵母抗体4个样本无影响抗大肠杆菌抗体22个样本无影响B.样本收集装置RIBA HCV 3.0 SIA的性能通过收集的抗HCV阳性和抗HCV阴性样本被评估，这些样本被置在真空采血管，血清分离管中，并含有以下种类的抗凝剂：EDTA的钾盐（15%），肝素的钠盐，ACD（B溶液），CPDA-1，或者4%柠檬酸钠。一个另外的研究用于比较管中收集样本和血袋中样本差异。所有收集设备和采用的抗