实验1 免疫沉淀凝集技术.ppt

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1、实验1: 免疫沉淀凝集技术,华西医院实验医学科临床免疫实验室安云飞2018.3.14,背景,胶乳凝集试验RF测定,实验原理,以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验： 聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原或抗体与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体或抗原发生凝集反应。,RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。,试剂和器材,RF检测试剂（商品化试剂）RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带）黑色反应板、滴管、搅拌棒等,操作方法,在黑色反应板上取3格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶乳颗粒试剂。用搅拌棒充分混匀后

2、，连续摇动23min后与对照比较，观察结果。,结果判断,胶乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性， 胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性；首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果，若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试剂有效；然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴阳性。,方法学评价,该试验方法简单、快速、特异性强、结果清晰易观察判断。观察时应注意排除非特异性凝集反应。如何进行半定量分析？,CIC测定,实验原理： PEG沉淀法,聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有较强的脱水作用，可引起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度测定技术中常用的增浊剂。,PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度

3、相关：2%PEG只能沉淀大分子， 4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物 大于5%PEG，选择性沉淀特性消失。,在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。,分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%4%PEG。血清中加入最终浓度约为3.5%的PEG后，其浊度与血清中免疫复合物含量相关，用分光光度计测定其OD值，代表免疫复合物相对含量。,试剂和器材,试剂1：0.1mol/L PH8.6硼酸缓冲液 试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液 仪器：721分光光度计,操作方法,加样：对每一份标本，取两试管按下表操作,操作方法,将以上反应管充分混匀，置室温1小时。用721分光光度计在460nm波长下测定OD值。关机，清洁仪器，盖上布罩。,正常参考值：OD0.15结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。本试验还受温度变化的影响很大，重复性差。CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。,内容：题目、实验原理、试剂及器材、 实验步骤、实验结果（注明样本编号和原始数据）、讨论等。实验报告由班长收齐后于下次上课时交上课老师。,