PCR实验室常用设备、试剂和耗材使用管理资料课件.ppt

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1、PCRPCR实验室常用设备、试剂和耗材实验室常用设备、试剂和耗材使用管理使用管理广西临床检验中心广西临床检验中心 周微雅周微雅2012.05.15n试剂准备区n加样器加样器n洁净工作台洁净工作台n低温冰箱低温冰箱n标本制备区n生物安全柜生物安全柜n高速高速( 冷冻冷冻)离心机离心机n漩涡振荡混旋器漩涡振荡混旋器n恒温水浴箱（金属浴）恒温水浴箱（金属浴）n加样器加样器n冰箱冰箱n扩增区（产物扩增及分析区）nPCR热循环仪（热循环仪（DNA扩增仪）扩增仪）精密电子分析天平放置地点： 试剂准备区 标本制备区 标识： 所在区域 校准状态型号型号容量容量 准确度（标准误差）准确度（标准误差） 精度（重复

2、性）精度（重复性）2 (L) 绝对误差绝对误差(L) 相对误差相对误差(%) 标准误差标准误差(L） 相对离差相对离差(%)P2 最小最小 0.2 0.024 12 0.012 6 0.5 0.025 5 0.012 2.50 最大最大 2 0.030 1.5 0.014 0.70P10 最小最小 1 0.025 2.5 0.012 1.25 5 0.075 1.5 0.030 0.60 最大最大 10 0.10 1 0.040 0.40P20 最小最小 2 0.1 5.0 0.03 1.50 5 0.1 2.0 0.04 0.80 10 0.1 1.0 0.05 0.50 最大最大 20 0

3、.2 1.0 0.06 0.30P100 最小最小 20 0.35 1.8 0.10 0.5 50 0.4 0.8 0.12 0.24 最大最大 100 0.8 0.8 0.15 0.15 设定容量 容量计读数由三位拨号数字组成（显示所转移液体容量） ，从上（最大有效数字）到下（最小有效数字）读取。利用底部刻度可将容量调节到更精确的分度。根据型号不同，数字可能是黑色或红色的。 P2 P10 P20 P100 P200 1 0 1 0 1 2 7 2 7 2 5 5 5 5 5 1.25l7.5l 12.5l 75l 125l离心分类离心分类 转头转速（转头转速（rpm） 微速离心微速离心 15

4、 ,00 0 低低/高速离心高速离心 2,00020,000 超速离心超速离心 120 ,000 离心分类离心分类 转头转速（转头转速（rpm） 微速离心微速离心 15 ,00 0 低低/高速离心高速离心 2,00020,000 超速离心超速离心 120 ,000 离心分类离心分类 转头转速（转头转速（rpm） 微速离心微速离心 15 ,00 0 低低/高速离心高速离心 2,00020,000 超速离心超速离心 120 ,000 对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上

5、级别实验室尤其要注意。所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。微型离心机则可放在安全柜内离心，但要注意其对安全柜气流的影响。如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。1. 所有离心机应处于正常工作状态/合格机械性能，根据厂家说明书进行操作。2. 离心机位于适宜位置和高度，工作人员能看见离心桶，便于进行各项操作。3. 离心管和标本容器根据厂家要求选用，最好使用塑料制品，使用前应检查有无破损。必须在安全柜内打开盖子必须在安全柜内打开盖子。4. 使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏

6、水或空离心桶配平时应该用蒸馏水或7070乙醇、异丙醇乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。（密封的离心桶/安全杯）5. 应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。不同型号生物安全柜（不同型号生物安全柜（BSCBSC）特征比较）特征比较1.1.安装上要求有一特殊管道通到室外、有一道活性炭过滤器、防爆的发动机及其它电路安装上要求有一特殊

7、管道通到室外、有一道活性炭过滤器、防爆的发动机及其它电路组成。组成。级柜如果操作挥发性化学物，则不能将废气排到室内。级柜如果操作挥发性化学物，则不能将废气排到室内。2.化学浓度不能超过最低爆炸浓度。化学浓度不能超过最低爆炸浓度。7070循环循环，3030外外排，操作排，操作口气流速口气流速度度 75ft/m75ft/minin。二级二级A2A2型型( (原原B3B3型型) )生物安全柜气流模式生物安全柜气流模式7070循环，循环，3030外排，操作口气外排，操作口气流速度流速度100ft/min100ft/min，可管道排气。，可管道排气。二级二级B1B1型生物安全柜气流模式型生物安全柜气流模

8、式3030循环，循环，7070外排，操作外排，操作口气流速度口气流速度100ft/min100ft/min，可管道排气。可管道排气。无循环，无循环，100100外排，操作口外排，操作口气流速度气流速度100ft/min100ft/min，外接管道。外接管道。1 1、有充分清洁与维护空间、有充分清洁与维护空间2 2、最佳安全柜摆设地点取决于安全柜所受到的、最佳安全柜摆设地点取决于安全柜所受到的外在气流干扰减到最小外在气流干扰减到最小3 3、避免高人流量通道、避免高人流量通道4 4、远离空调排气口，排气扇、远离空调排气口，排气扇 根据根据 ANSI/NSF49:2002 ANSI/NSF49:20

9、02 和英国标准和英国标准BS5726:1992BS5726:1992推荐推荐安装指南安装指南( (安全柜的安装需要由经过培训的专业安全柜的安装需要由经过培训的专业人员进行人员进行) )安安 装装 地地 点点地点地点1 1：远离周围的气流扰动因素：远离周围的气流扰动因素，是推荐的最佳安装地点。，是推荐的最佳安装地点。地点地点2 2：太靠近门、走道以及空调：太靠近门、走道以及空调出风口，影响安全柜的气流。出风口，影响安全柜的气流。地点地点3 3：空调出风口会影响安全柜：空调出风口会影响安全柜的气流。的气流。地点地点4 4：太靠近门，侧面太靠近墙：太靠近门，侧面太靠近墙壁。壁。地点地点5 5：如果

10、相邻的回风口气流不：如果相邻的回风口气流不影响安全柜的气流。那影响安全柜的气流。那5 5的位置的位置也也适合安装安全柜。适合安装安全柜。比安全柜顶部至比安全柜顶部至少高出少高出100mm100mm生物安全柜的使用规范生物安全柜的使用规范1. 每次使用前检查2. 不打开观察窗3. 列出工作所需物品的清单，以减少双臂进入破坏气流4. 打开风机5-10min5. 窗式报警器、气流报警器任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作都会危及操作者任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作都会危及操作者的安全的安全 操作准备操作准备 物品摆放与防污染措施物品摆放与防污染措施1. 尽量少放少放仪器和物品2. 不要阻塞阻塞气口

11、的空气流通3. 废物容器/袋置安全柜内 密封 消毒4. 安全柜内洁净物品/污染物品分开放置分开放置（消毒巾的垫置）（消毒巾的垫置）5. 操作尽量工作台中央，注意动作对定向气流的影响6. 工作用纸不允许放在生物安全柜内7. 尽量减少操作者背后人员的走动、快速开关实验室的门减少操作者背后人员的走动、快速开关实验室的门（进入时，敲门提醒正在操作的人员） 在每次使用前清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何微生物），但不包括送风滤器的扩散板； 在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所有物品应清除表面污染后，才能移出安全柜； 在实验结束后，应擦拭生物安全柜的工作台面、四

12、周以及玻璃的内外侧等部位以清除表面的污染。 在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。标本溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的表面。在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或重新安置之前，必须消毒。最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行5min以净化内部的气体。 Mg2+Mn2+dCTPdGTPdUTPdATPTaq DNA 多 聚 酶rTth DNA 多 聚 酶AmpErase 生 物 素 标 记 的 引 物 和和 或或 和和血 清 盘 结 果血 清 盘 结

13、果合 计待检试剂盒结果aba + b待 检 试 剂 盒结 果 cdc + d合 计a + cb + da+b+c+d血清盘结果血清盘结果合 计待检试剂盒结果aba + b待检试剂盒结果cdc + d合 计a + cb + da+b+c+dn密封性密封性：n制备一个含1%-2%甘油及色素的水溶液（甲基橙、红墨水、蓝墨水），如最大体积为100ul，则将加样器吸取体积调到110-120ul后，套上吸头吸取上述有色液体。如吸头质量好，有色液体不应出现在滤芯之上，否则说明滤芯不严。nPCR抑制物抑制物：n从新购的离心管中，抽取6-10支，采用已知的高、中、低3 个浓度的HBV DNA样本，使用抽取的离心

14、管按程序进行检测，每一浓度双管重复，同时使用已知无PCR抑制物的离心管作为对照，如结果与预期或对照管明显偏低，（如1-2个数量级），则证明有抑制物存在。n密封性密封性：n从新购的离心管中，抽取6-10支，加入一定量的液体，（如500ul的水），在100条件下10分钟，观察是否有暴管现象。n抽取6-10支，加入一定量的液体，高速离心，观察离心管是否的破管。谢谢大家！谢谢大家！人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。