色谱苏丹红分析课件.ppt

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1、一个中国人幸福的一天！ ！ ！ 早晨起床，掀开黑心绵作的被子，用致癌牙膏刷完牙，喝杯过了期的碘超标还掺了三聚氰胺的牛奶，吃根柴油炸的洗衣粉油条，外加一个苏丹红咸蛋，在票贩子手里买张车票，准时赶到地下烟厂上班，九点三十分偷偷用山寨手机看股票从6124.04点跌到1240.46点，中午在餐馆点一盘用地沟油炒的避孕药喂的黄膳，再加一碟敌敌畏喷过的白菜，盛两碗杯陈化粮煮的毒米饭；晚上蒸一盘病的瘦肉精养大的死猪肉做的腊肉，沾上点毛发勾兑的毒酱油，夹两片大粪水浸泡的臭豆腐，还有用福尔马林泡过的凉拌海蜇皮，抓两个添加了漂白粉和吊白块的大馒头，还喝上两杯富含甲醇的白酒。睡前喝杯用三聚氰胺勾兑的牛奶 中国人，地

2、球上生命力和抵抗力最强的生物！ 红心鸭蛋红心鸭蛋 2006 2006 年年11 11 月月15 15 日，日，石家庄平山县，当地将石家庄平山县，当地将查获的查获的5100 5100 只喂食苏只喂食苏丹红的鸭子进行扑杀、丹红的鸭子进行扑杀、深埋，对深埋，对“涉红涉红” 鸭鸭蛋和饲料也将做填埋处蛋和饲料也将做填埋处理。苏丹红是一种人工理。苏丹红是一种人工合成的工业染料，在食合成的工业染料，在食品中非天然存在，有致品中非天然存在，有致癌性，在食品行业中明癌性，在食品行业中明令禁用令禁用。基本信息基本信息1.1.苏丹红是一种人工合成的苏丹红是一种人工合成的红色染料，常作为一种工红色染料，常作为一种工业

3、染料，被广泛用于如溶业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油的增色剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光方面。以及鞋、地板等增光方面。 2.2.物理性质：黄色粉末，熔物理性质：黄色粉末，熔点为点为134 134 ，不溶于水，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于油脂、微溶于乙醇，易溶于油脂、矿物油、丙酮和苯。矿物油、丙酮和苯。乙醇乙醇溶液呈紫红色，在浓硫酸溶液呈紫红色，在浓硫酸中呈品红色，稀释后成橙中呈品红色，稀释后成橙色沉淀。色沉淀。 3.3.结构式和结构式和化学式：化学式： 苏丹红为亲脂苏丹红为亲脂性偶氮化合性偶氮化合物，主要包括物，主要包括、和和四种类型。四种类型。 苏丹红苏丹红I I：1-1-苯

4、基偶氮苯基偶氮-2-2-萘酚萘酚 苏丹红苏丹红IIII：1-(2,4-1-(2,4-二甲基苯二甲基苯) )偶氮偶氮-2-2-萘酚萘酚 苏丹红苏丹红IIIIII：1-4-(1-4-(苯基偶苯基偶氮氮) )苯基苯基 偶氮偶氮-2-2-萘酚萘酚 苏丹红苏丹红IVIV：1-2-1-2-甲基甲基-4-(2-4-(2-甲基苯甲基苯) )偶氮偶氮 苯基苯基 偶氮偶氮-2-2-萘萘酚酚体内代谢体内代谢 进入体内的苏丹红主进入体内的苏丹红主要通过胃肠道微生物要通过胃肠道微生物还原还原酶酶、肝和肝外组织微粒体、肝和肝外组织微粒体和细胞质的和细胞质的还原酶还原酶进行代进行代谢，在体内代谢成相应的谢，在体内代谢成相应

5、的胺类物质。胺类物质。在多项体外致在多项体外致突变试验和动物致癌试验突变试验和动物致癌试验中发现苏丹红的致突变性中发现苏丹红的致突变性和致癌性与代谢生成的和致癌性与代谢生成的胺胺类物质类物质有关。有关。 苏丹红苏丹红I I在体内可以被还原代谢为初级产物在体内可以被还原代谢为初级产物苯胺苯胺和和1-1-氨基氨基-2-2-萘酚萘酚。 苏丹红苏丹红IIII在体内代谢可产生在体内代谢可产生2,4-2,4-二甲基苯胺二甲基苯胺和和1-1-氨基氨基-2-2萘酚萘酚。 苏丹红苏丹红IIIIII在体内代谢可产生、在体内代谢可产生、1-1-氨基氨基-2-2萘酚萘酚、苯胺苯胺、对苯二胺、对苯二胺、4 4氨基偶氮苯

6、氨基偶氮苯和和1-1-（4-4-氨基苯）偶氮氨基苯）偶氮-2-2萘酚萘酚。 苏丹红苏丹红IVIV在体内代谢可产生在体内代谢可产生2 2氨基氨基-5-5-（2-2-甲基苯）甲基苯）偶氮甲苯偶氮甲苯、 1-1- （4-4-氨基氨基-2-2-甲基苯）偶氮甲基苯）偶氮-2-2-萘酚萘酚、2,5-2,5-二氨基甲苯二氨基甲苯、1-1-氨基氨基-2-2萘酚萘酚和和 邻邻- -甲苯胺甲苯胺。 二十世纪末，英国食品二十世纪末，英国食品标准局（标准局（The Food The Food Standard AgencyStandard Agency，FSAFSA）就含有添加苏丹红色素就含有添加苏丹红色素的食品向消

7、费者发出警的食品向消费者发出警告，并在其网站上公布告，并在其网站上公布了可能含有苏丹红了可能含有苏丹红I I的产的产品清单。到了二十一世品清单。到了二十一世纪初，清单上的产品增纪初，清单上的产品增加到了加到了474474种，包括种，包括香肠、香肠、泡面、熟肉、馅饼、辣泡面、熟肉、馅饼、辣椒粉、调味酱椒粉、调味酱等产品。等产品。 欧洲调味品协会专家委员会欧洲调味品协会专家委员会（the Expert Committee on the Expert Committee on Flavourings of the Council Flavourings of the Council of Europ

8、eof Europe）的资料信息显示，）的资料信息显示，欧洲每天红辣椒粉的人均消费量欧洲每天红辣椒粉的人均消费量为为50-500mg50-500mg，而红辣椒粉中苏丹，而红辣椒粉中苏丹红红I I的检出量为的检出量为2.8-3500mg/kg2.8-3500mg/kg，从而推算欧洲人每天苏丹红从而推算欧洲人每天苏丹红I I的的人均可能摄入量为人均可能摄入量为0.14 -17500.14 -1750g g。而在法国向欧洲调味品协会专家而在法国向欧洲调味品协会专家委员会提交的一份报告中指出，委员会提交的一份报告中指出，人均每天辣椒（包括红辣椒和辣人均每天辣椒（包括红辣椒和辣椒粉）的消费量和最大消费量

9、分椒粉）的消费量和最大消费量分别为别为7777和和264mg264mg，按辣椒粉中苏，按辣椒粉中苏丹红丹红I I的检出量的检出量2.8-3500mg/kg2.8-3500mg/kg进进行推算，则欧洲人每天人均苏丹行推算，则欧洲人每天人均苏丹红红I I的摄入量为的摄入量为0.2 -270 0.2 -270 g g，最，最大摄入量为大摄入量为0.7 -9240.7 -924g g。 欧洲调味品协会专家委员会欧洲调味品协会专家委员会（the Expert Committee on the Expert Committee on Flavourings of the Council Flavourin

10、gs of the Council of Europeof Europe）的资料信息显示，）的资料信息显示，欧洲每天红辣椒粉的人均消费量欧洲每天红辣椒粉的人均消费量为为50-500mg50-500mg，而红辣椒粉中苏丹，而红辣椒粉中苏丹红红I I的检出量为的检出量为2.8-3500mg/kg2.8-3500mg/kg，从而推算欧洲人每天苏丹红从而推算欧洲人每天苏丹红I I的的人均可能摄入量为人均可能摄入量为0.14 -17500.14 -1750g g。而在法国向欧洲调味品协会专家而在法国向欧洲调味品协会专家委员会提交的一份报告中指出，委员会提交的一份报告中指出，人均每天辣椒（包括红辣椒和辣人

11、均每天辣椒（包括红辣椒和辣椒粉）的消费量和最大消费量分椒粉）的消费量和最大消费量分别为别为7777和和264mg264mg，按辣椒粉中苏，按辣椒粉中苏丹红丹红I I的检出量的检出量2.8-3500mg/kg2.8-3500mg/kg进进行推算，则欧洲人每天人均苏丹行推算，则欧洲人每天人均苏丹红红I I的摄入量为的摄入量为0.2 -270 0.2 -270 g g，最，最大摄入量为大摄入量为0.7 -9240.7 -924g g。危险性评价危险性评价 1.1.苏丹红苏丹红I I (1)(1)致癌性致癌性 国际癌症研究机构将苏丹红国际癌症研究机构将苏丹红I I归为三类致癌物，即动物致癌物，归为三类

12、致癌物，即动物致癌物，主要基于体外和动物试验的研究主要基于体外和动物试验的研究结果尚不能确定对人类有致癌作结果尚不能确定对人类有致癌作用。用。肝脏肝脏是苏丹红是苏丹红I I产生致癌性的产生致癌性的主要主要靶器官靶器官，此外还可引起膀胱、，此外还可引起膀胱、脾脏等脏器的肿瘤。脾脏等脏器的肿瘤。 (2)(2)遗传毒性遗传毒性 苏丹红苏丹红 I I 对沙门氏伤寒杆菌具有致突变作用；对小对沙门氏伤寒杆菌具有致突变作用；对小鼠淋巴瘤细胞具有致突变作用；大鼠骨髓微核试验呈阳鼠淋巴瘤细胞具有致突变作用；大鼠骨髓微核试验呈阳性；可细胞姐妹染色单体交换；可引起小鼠胃和结肠细性；可细胞姐妹染色单体交换；可引起小鼠

13、胃和结肠细胞的胞的DNADNA断裂。断裂。(3)(3)致敏性致敏性 苏丹红苏丹红I I具有致敏性，具有致敏性，可引起人体皮炎。印度可引起人体皮炎。印度妇女习惯使用一种点在妇女习惯使用一种点在前额的前额的KumkumsKumkums牌化妆牌化妆品。但目前有报道称，品。但目前有报道称，有人因涂抹有人因涂抹kumkumkumkum而而引发过敏性接触性皮炎。引发过敏性接触性皮炎。通过色谱分析，通过色谱分析，7 7个个kumkumskumkums品牌中有品牌中有3 3个个可检测到不同浓度的苏可检测到不同浓度的苏丹红丹红I I。(4)(4)代谢产物代谢产物 代谢产物苯胺和代谢产物苯胺和1-1-氨基氨基-2

14、-2萘酚：苏丹红萘酚：苏丹红I I的代谢产的代谢产物物苯胺苯胺有毒，依据其对有毒，依据其对血红蛋白毒性作为敏感终点血红蛋白毒性作为敏感终点，其，其最小观察到有害作用剂量（最小观察到有害作用剂量（LOAELLOAEL）为）为7mg/kg/day7mg/kg/day，但，但在慢性毒性试验中尚未求出最大未观察到有害作用剂量在慢性毒性试验中尚未求出最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)(NOAEL)。基于通过食品、空气和饮水的暴露途径，依。基于通过食品、空气和饮水的暴露途径，依据据LOAELLOAEL为为7mg/kg/day7mg/kg/day，得出其安全限（，得出其安全限（MOSMOS）为）为0.7

15、 0.7 10106 mg/kgbw/day6 mg/kgbw/day。有研究显示，人体多次每日摄。有研究显示，人体多次每日摄入入0.4mg/kg0.4mg/kg苯胺可引起血红蛋白毒性。苯胺可引起血红蛋白毒性。 萘酚与局部皮肤接触可引起脱皮，甚至产生永久性萘酚与局部皮肤接触可引起脱皮，甚至产生永久性色素沉着。色素沉着。 2.2.苏丹红苏丹红II II IARC IARC将苏丹红将苏丹红IIII和其代谢产物和其代谢产物2,4-2,4-二甲基苯胺（二甲基苯胺（2,4-2,4-xylidinexylidine）均列为三类致癌物，尚没有对人致癌作用的证）均列为三类致癌物，尚没有对人致癌作用的证据。动物

16、试验结果显示，给小鼠据。动物试验结果显示，给小鼠2,4-2,4-二甲基苯胺，高剂量二甲基苯胺，高剂量（30mg/kg30mg/kg）组雌性小鼠肺癌发生率较对照组显著升高。）组雌性小鼠肺癌发生率较对照组显著升高。尽管目前欧盟还没有辣椒粉中苏丹红尽管目前欧盟还没有辣椒粉中苏丹红IIII、IIIIII和和IVIV的检出的检出范围，但推测其在食品中的检出范围可能与苏丹红范围，但推测其在食品中的检出范围可能与苏丹红I I相似。相似。以最坏的假设如人体每天最大可能摄入苏丹红以最坏的假设如人体每天最大可能摄入苏丹红I I为为17501750g g，则理论上会还原产生则理论上会还原产生767767g2,4-g

17、2,4-二甲基苯胺，相当于人体二甲基苯胺，相当于人体每天每天12.812.8g/kgg/kg，诱发动物肿瘤剂量，诱发动物肿瘤剂量30mg/kg30mg/kg是其是其2.32.310103 3倍。如以每天人体摄入较低的苏丹红倍。如以每天人体摄入较低的苏丹红II 5II 5g g来推算，则理来推算，则理论上通过还原反应将产生论上通过还原反应将产生2.22.2g g的苯胺，即相当于人体每的苯胺，即相当于人体每天摄入天摄入0.0370.037g/kg(g/kg(按成人正常体重计算按成人正常体重计算) )，动物试验诱发，动物试验诱发动物肿瘤剂量动物肿瘤剂量30mg/kg30mg/kg是其是其8.28.2

18、10105 5倍。倍。3.3.苏丹红苏丹红IIIIII IARC IARC将苏丹红将苏丹红IIIIII列列为三类致癌物，但将其初为三类致癌物，但将其初级代谢产物级代谢产物4-4-氨基偶氮苯氨基偶氮苯（4-aminoazobenzene4-aminoazobenzene）列为二类致癌物，即对人列为二类致癌物，即对人可能致癌物。动物试验显可能致癌物。动物试验显示，给予大鼠示，给予大鼠4-4-氨基偶氮氨基偶氮苯苯104104周，剂量为周，剂量为80-80-400mg/kg400mg/kg，大鼠肝癌发生，大鼠肝癌发生率明显升高。率明显升高。 4.4.苏丹红苏丹红IVIV IARC IARC将苏丹红将苏

19、丹红IVIV被国际上列为三类致癌物，是一种被国际上列为三类致癌物，是一种工业染料，同样用于鞋油和蜡烛等工业产品的染色，对工业染料，同样用于鞋油和蜡烛等工业产品的染色，对人体可能致癌人体可能致癌。 苏丹红苏丹红”并非食品添加剂，而是一种化学染色剂。并非食品添加剂，而是一种化学染色剂。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。苏丹红属于化对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。苏丹红属于化工染色剂，主要是用于石油、

20、机油和其他的一些工业溶工染色剂，主要是用于石油、机油和其他的一些工业溶剂中，目的是使其增色，也用于鞋、地板等的增光。剂中，目的是使其增色，也用于鞋、地板等的增光。 苏丹红本不应该作为食品添加剂来使用，所以它苏丹红本不应该作为食品添加剂来使用，所以它的无庸会严重损害人体健康，相反添加有益物质对人体的无庸会严重损害人体健康，相反添加有益物质对人体健康有重要意义。健康有重要意义。仪器分析实验：食品中苏丹红染料的测定仪器分析实验：食品中苏丹红染料的测定 标准依据标准依据: GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定食品中苏丹红染料的测定 一、目的要求一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和

21、方法。二、实验原理二、实验原理 苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。三、三、仪器与试剂（一）试剂 1、乙腈（色谱纯） 2、丙酮（色谱纯、分析纯） 3、甲酸（分析纯） 4、乙醚（分析纯） 5、正己烷（分析纯） 6、无水硫酸钠（分析纯） 7、层析柱管：1cm (内径)5cm (高)的注射器管。 8、层析用氧化铝（中性 100目200目） 9、氧化铝层析柱 10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。 11、标准物质：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红；纯度95%

22、。 12、标准贮备液：分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。（二）仪器 1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器） 2、分析天平：感量 0.1mg 3、旋转蒸发仪 4、均质机或匀浆机 5、粉碎机 6、离心机 7、0.45m有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。（二）样品处理： 1、红辣椒粉等粉状样品称取1g 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL 20mL 正己烷，超声处理5min，滤纸过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转

23、蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL 30mL 正己烷洗柱，直至流出液无色，用含5%丙酮的正己烷液60mL 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m有机滤膜过滤后待测。 2、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品 称取0.5g2g（准确至0.001 g）样品于小烧杯中，加入约1mL 10mL 正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解（中

24、低温）。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱经0.45m有机滤膜过滤后待测”操作。 3、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品 称取10g 20g (准确至0.01g)样品于离心管中，加10mL 20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL 正己烷 ：丙酮 =3 ：1，匀浆5min ，3000 rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL 正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱经0.45m有机滤膜过滤后待测”操作。 4、香肠等肉制品 称取粉碎样品10g 20g

25、 (准确至0.01g)于三角瓶中硼砂乙酸锌脱脂，过滤，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清夜，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱经0.45m有机滤膜过滤后待测”操作。（三）测定 色谱检测条件（1）色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5m 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱）（2）流动相： 溶剂A 0.1%甲酸的水溶液 ：乙腈 = 85 ：15； 溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液 ：丙酮 = 80 ：20（3）梯度洗脱 (4) 柱温：30（5）检测波长：苏丹红 478nm ；苏丹红

26、、苏丹红、苏丹红 520nm ；于苏丹红出峰后切换。2、标准曲线制备 吸取标准贮备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至25mL ，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g / mL ，各进样量10L，绘制标准曲线。 3、样品测定：吸取10L样品处理液，按标准曲线制备检测色谱条件对样品进行测定。与标样对照，根据峰保留时间定性以及相应峰面积定量。苏丹红色素色谱分离图 五、结果计算 X= c*V/m 式中 X样品中苏丹红含量（mg / kg）； c 由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度（g / mL）； V样液定容体积（mL）； m 样品质量（g）。