植物磷含量测定(艾老师)(共4页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上植物有效磷含量的测定（游离态磷）1试剂配制（1） 配100 ml l0%(w/v)的高氯酸，取7.874 ml 72%的高氯酸溶液。(高氯酸：分子量 100.46，相对密度1.764)。配 800 ml 5%(w/v)的高氯酸，取31.494 ml 72%的高氯酸溶液。（2） 配制硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）：即 0.5N H2SO4中含有0.4%（w/v）的钼酸铵。溶解0.8g钼酸铵(NH4)6Mo7O244H2O于100ml水中。然后徐徐加入5 ml的浓H2SO4（98%）。充分混匀，冷却后加水至200 ml。 （3） 配制10%(w/v)抗坏血酸溶液（溶液B）：溶

2、解2 g抗坏血酸于水中，最后加水至20 ml中，贮于棕色瓶中，在4冰箱保存。（4） 工作溶液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B。注：工作溶液需要每天配制， 配好后放置2小时后再使用。 2. 操作步骤 （1） 取0.5克鲜样用液氮研磨成粉末，在4放置(冰上或者冰箱)至样品冻融，加入 1ml 10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均匀。（2） 匀浆液用5%(w/v)的高氯酸（PCA）稀释10倍，于冰上放置30分钟。 （3） 于4，10000 g离心10分钟，上清液用于有效磷含量的测定（钼蓝法）。（4） 取2 ml工作溶液与1 ml样品上清液混合，于40温育20分钟。 （5） 反应液在冰上冷却后，于

3、820 nm可见光波长下测定吸收值。如样品浓度过高， 应适当稀释，使其OD值落在标线的线性范围内。3磷标准曲线的制作（1） 磷标准溶液配制（60 ppm P）：溶解0.230 g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于100 ml蒸馏水中，即得600 ppm P的磷标准溶液，再将600 ppm P的磷标准溶液用提取剂稀释10倍，得60 ppm P的磷标准溶液。（2） 标准曲线绘制：将60 ppm P的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成0.6、1.2、2.4、3.6、4.8和6 ppm P的标准系列溶液。提取剂用10%(w/v)的高氯酸和5%(w/v)的高氯酸按体积比1:9混合配制。用提取剂与工作溶液的反

4、应液作空白。4. 计算 植物有效磷(Pi)含量(mg Pi/g FW)=OD值*(V/m)*(V2/V1)*C OD值 换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L) V 样品制备溶液的ml数，即样品所加提取剂的体积(此为0.01 L) m 样品鲜重(g)(根据实际称得的质量计算) V1 吸取反应所用体积(1 ml) V2 反应液总体积数(3 ml) C 样品的稀释倍数(如果样品浓度过高，需稀释至1 ml后再反应)二十、植物总磷的测定1. 试剂配制 （1） 二硝基酚(2,6-或2,4-)：溶解二硝基酚0.25 g 100ml水中。此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。 （2）

5、4 mol/L氢氧化钠溶液：溶解NaOH 16 g于100 ml水中。 （3） 2 mol/L（1/2H2SO4）溶液：吸取浓硫酸6 ml，缓缓加入80 ml水中，边加边搅动，冷却后加水至100 ml。 （4） 酒石酸锑钾溶液：称取酒石酸氧锑钾K(SbO)C4H4O6 0.5 g，溶解于100 ml水中，制成0.5%的溶液。 （5） 钼锑混合液：另取钼酸铵(NH4)6Mo7O244H2O10 g溶于450 ml水中，徐徐加入153 ml浓硫酸，边加边搅拌。再将0.5%的酒石酸锑钾溶液100 ml加入到钼酸铵溶液中，最后加水至1 L，充分摇匀，贮于棕色瓶中。（6） 钼锑抗试剂：临用前（当天），称

6、取1.5 g左旋抗坏血酸，溶于100 ml钼锑混合液中，混匀。有效期24个小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中H2SO4为5.5 mol/L，钼酸铵为10 g/L，酒石酸锑钾为0.5 g/L，抗坏血酸为15g/L。 2操作步骤 （1） 称取植物样品(约0.1450 g0.1550 g，已用剪刀剪碎)，置于消煮管中。（2） 然后加入浓H2SO4 8 mL轻轻摇匀。（3） 瓶口放一小漏斗，在电炉上消煮，300，30分钟。 （4） 当溶液加热至微沸并全部呈棕黑色时取下，加10滴H2O2。 （5） 再加热至微沸，510分钟，取下。 （6） 稍冷后重复加H2O2 510滴，再消煮。（7） 如此重复2

7、3次，每次添加的H2O2应逐次减少。 （8） 消煮到溶液呈无色或清亮后，再加热约510 min，以除尽剩余的H2O2，关闭电炉，让其自然冷却30分钟后，取下，继续冷却。 （9） 用少量水冲洗漏斗，洗液流入消煮管，将消煮液定量地移入50ml容量瓶中，摇匀，冷却至室温。（10） 用蒸馏水定容，用滤纸过滤到50ml离心管中，供磷的测定(钼锑抗比色法)。 （11） 吸取消煮液4ml注入50ml容量瓶中(根据样品浓度调整反应液数量)，加水至约 30ml。（12） 加二硝基酚指示剂2滴，滴加4N NaOH溶液直至溶液变为黄色。（13） 再加2N H2SO4数滴，使溶液的黄色刚好褪去。（14） 然后加钼锑抗

8、试剂5 ml，加水定容至50 ml。摇匀，30 min后，用820 nm波长进行比色测定（用空白消煮液与钼锑抗试剂的反应液调零）。3磷标准曲线的制作 （1）磷标准溶液配制（50 ppm P）：准确称取0.0220 g KH2PO4，溶解于40 ml水中，加浓硫酸0.5 ml（加浓硫酸可以防止长霉菌，使溶液长期保存），转入100 ml容量瓶中，加水至刻度，得50 ppm（即50 g/ml）的P标准溶液。吸取上述磷标液5 ml，稀释至50 ml，即得 5 ppm的P标准溶液（此溶液不宜久存）。（2）标准曲线绘制：准确吸取5 ppm的P标液0、2、4、6、8、10 ml，分别放入50 ml的容量瓶中，加水至约30 ml，再加空白试验定容后的消煮液5 ml，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5 ml，最后用水定容至50 ml，30 min后于波长820 nm进行比色。4计算植物总磷(P)含量(mg P/g DW)=OD值*(V/m)*(V2/V1)OD值 换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L)V 样品制备溶液的体积(0.05 L)m 样品干重(g)(根据实际称得的质量计算)V1 吸取反应所用体积(根据样品浓度调整)V2 反应液总体积数(50 ml)专心-专注-专业