激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书(共40页).docx

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1、精选优质文档-倾情为你奉上激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书开启系统1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.)2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON2-3氦氖红 (633 nm) ON52313.打开汞灯电源开关.4.登陆 Windows XP系统.User ID:AdministratorPassword: fluoview5.双击快捷方式：打开 FV10-ASW应用软件.User ID: Administrator Password: Administrator* 系统软件的启动

2、需要等待一定时间.*DIC 元件1324手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节.显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜. (参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW软件中的图标.Note1:使用TD滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”，如果不是，用手柄按下DICT图标5.标本聚焦Memo按照7-1的操作转换物镜的倍率之后，对：物镜各物镜对应的DIC元件*进行操作.显微镜镜下观察荧光观察123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo关于荧光滤色片NIBA：蓝色激发/绿色荧光（例

3、：FITC、EGFP等）WIG ：绿色激发/红色荧光（例：Rhodamine、DsRed等）1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.激光输出的调节明场观察(显微镜镜下观察) 荧光观察(显微镜镜下观察) 扫描的按钮选择XYZ,XYT或XYL每个通道的调节共聚焦的孔径大小卤素灯的光强调节Kalman方式染料选择光路图取图条件的保存调出取图条件TwinScanner 设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda扫描的设定物镜聚焦时间间隔和时间计数(用于XYT或XT扫描)扫描带宽选择扫描模式扫描速专

4、心-专注-专业获取单张图像（XY平面）（荧光图像）123染料选择后的显示界面 例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的 按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)4564.点击XY Repeat按钮开始扫描.5.调节绿色FITC)(图像.(图像调节的略述如下. 更多的信息,参照附录1.)6.点击St

5、op按钮停止扫描. (参照Memo.)1探测器的灵敏度调节HV()2共聚焦的孔径大小调节(C.A.)3激光输出的调节(Laser)123调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述789107.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出现.10.保

6、存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.) 同步扫描123染料选择后的显示界面1. 点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3

7、.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)44.点击XY Repeat按钮开始扫描.5.调节绿色Alexa(Fluor488)图像和红色(Alexa Fluor546)图像.(图像调节的略述如下. 更多的信息,参照附录1.)6.点击Stop按钮停止扫描. (参照Memo.)56Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)1探测器的灵敏度调节(HV)2共聚焦的孔径大小调节)(C.A.3激光输出的调节(Laser) 123调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述789107

8、.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:

9、创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.获取单张图像（XY平面）（荧光图像）123染料选择后的显示界面例：绿色荧光（ Alexa 488 ）红色荧光（ Alexa 546 ）二重染色序列扫描 (这里介绍线序列扫描.)1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)45674.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击XY Repeat按

10、钮开始扫描.6.调节绿色(AlexaFluor488)图像和红色(AlexaFluor546)图像.(图像调节的略述如下. 更多的信息,参照附录1.)7.点击Stop按钮停止扫描. (参照Memo.)1探测器的灵敏度调节(HV)2共聚焦的孔径大小调节)(C.A.3激光输出的调节Laser) (123调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述8910118.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式

11、. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)(XY平面-单标+微分干涉差)1234染料选择后的显示界面1. 点击FV10-ASW软件中的按钮关闭

12、汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)4.选择TD1.(XY平面-单标+微分干涉差) 55.点击XY Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色()FITC图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下. 更多的信息,参照附录1.)7.点击Stop按钮停止扫描. (参照Memo.)67Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)1探测器的灵敏度调节(HV)2共聚焦的孔径大

13、小调节C.A.)(3激光输出的调节(Laser) 123调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低) 到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述891011(XY平面-单标+微分干涉差) 8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标

14、，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.(XYZ扫描-双标)1456728Memo和按钮 :点击移动1.0m.: 点击移动0.1m.1.采用13和14页步骤1到7.确定Z轴的上限和下限如下.2.输入StepSize大小(点击OP按钮可以使用推荐的值), 并选择 .3.点击XY Repeat按钮开始扫描.4.点击和 按钮上移焦点位置.(参照Memo

15、.)5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定.6.点击和 按钮下移焦点位置.(参照Memo.)7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop按钮停止扫描.910111213(XYZ扫描-双标) 9.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)10.选择Depth按钮.11.点击XYZ按钮取得图像.12.点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)” 2D界面就出现.13.保存该幅图像:右击图像管

16、理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)绿色荧光-1)YOYO(双标1231.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门.同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击按钮检查光路.3.做如下设置.选择BS20/80 或DM405/488.选择488nm作为激发光源.选择Mirror.只选择CHS1.*可以通过调用扫描状态来实现该

17、设置. 更多的信息, 参照附录5.456794.点击按钮 , 出现光谱设置窗口.5.设置CHS1光谱带宽为10 nm, 以此为例.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)6.点击XY Repeat按钮开始扫描.7.在观察图像的同时, 移动光谱带到图像最亮的位置状态.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)注: 移动光谱带位置要保持光谱带宽为10 nm不变.8.调节图像.(参照附录1.)9.点击Stop按钮停止扫描.10111213151410选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式

18、. 更多的信息，参照附录2.)11设定要扫描的波长范围, 光谱带宽和步距.Start = 开始波长End = 结束波长Resolution = 光谱带宽StepSize = 步距12选择Lambda按钮.13点击XYL按钮取得图像.14点击SeriesDone按钮, “2D ViewLiveImage(x)” 2D界面就出现.15.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“oib” 和oif类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)显示状态的切换1:1显示帧的播放选择结束帧投影的切换3D重建放大调整窗口的大小动画播放速度选择开始帧文本不同形状的ROI区

19、域Ch1 displayCh2 display点击按钮转换显示模式 1. 双击资源管理器中要选择打开的文件.121.点击按钮 并选择.2.要保存此图像, 右击此图像, 选择Save Display并命名.(比例尺的使用) 123451.点击按钮 .2.点击图像的同时, 拖放此比例尺到一个特定的位置.3.点击手柄的左端或右端, 移动鼠标. 改变比例尺的大小4.选择比例尺并右击选择属性的设置.5.设置具体的比例尺属性.改变文本, 颜色, 字体等.1345(3D图像的重建)以一定的角度观察3D图像1.点击按钮 .2.创建3D图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像. 要保存此图像, 进行下一页第6步的

20、操作. 观察3D图像的某个横截面4.点击按钮并选定 .5.拖动鼠标观察某个垂直横断面. 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作.(3D图像的重建68保存上一页中第3、5选项的图像6.点击按钮 .7.会创建一个2D图像 (带文件名).8.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.MemoFV10-ASW专用的图形格式OIF格式:创建“一个含(16-bit TIFF)的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.OIB格式:创建单个的OIF格式的文件, 方便进行移动和进行其它的操作.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW软件专用的图1341.点击按钮 .2.创建3D图像

21、.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.动画的播放4.点击并控制按钮实现图像围绕着 X-轴旋转.再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Y-轴旋转.再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Z-轴旋转.再次点击停止旋转.234例:绿色荧光Alexa Fluor(488)和绿色荧光-1)(YOYO双标56Unmixed image此处显示分解光谱的通道分配1.打开一幅Alexa Fluor488和YOYO1双标的XYL图像.2.分别为Alexa Fluor488和YOYO1选定一个封闭的区域.3.从Processing下拉菜单中选择Spectral Deconvolution图标.4.

22、双击ROI1和ROI2区域.5.检查处理类型设置为“Normal”并且点击Execute按钮.6.获得图像.例:绿色荧光(Alexa Fluor 488)和绿色荧光 (YOYO-1)双标24356记载的荧光光谱在此显示.1. 打开一幅 Alexa Fluor 488单标取样的XYL图像.2. 为 Alexa Fluor 488选定一个封闭的区域.3. 从Processing下拉菜单中选择Spectral Deconvolution图标.4. 双击ROI1区域.5. 点击Save Profile图标.6. 输入保存的名字并且点击OK按钮将Alexa Fluor 488的光谱记载到数据库中.7.

23、对于YOYO1单标, 重复1-6步.891011Unmixed image12此处显示分解光谱的通道分配8.打开一幅 Alexa Fluor 488和 YOYO1 双标的XYL图像.9.从Processing下拉菜单中选择Spectral Deconvolution图标.10.双击数据库中记载的 Alexa Fluor 488 和 YOYO1图标.11.检查处理类型设置为 “Normal”并且点击Execute按钮.12获得图像.2345例 :两种类型荧光标记的样品Unmixed image此处显示分解光谱的通道分配1.打开一幅具有两种类型荧光标记的XYL图像.2.从Processing下拉菜

24、单中选择SpectralDeconvolution图标.3.选中两个检查框用于计算.(具有三种类型荧光标记时要选中三个检查框.)4.检查处理类型设置为“Blind”并且点击Execute按钮.5.获得图像. XY或者XYZ图像的每个通道存为TIFF格式的文件XY或者XYZ通道合并的图像存为TIFF格式的文件带有比例尺的图像存为BMP格式的文件动态图像存为AVI格式的文件123121.右击图像管理器中显示的图像图标, 选择另存为保存该幅图像.2.设置Save as类型为 TIFF并保存.* 存为BMP 和 JPEG格式也可以.1.右击图像管理器中显示的图像图标, 选择另存为保存该幅图像.2.设置

25、Save as类型为 TIFF并保存.3.检查要合并的通道并保存.* 存为BMP 和 JPEG格式也可以.*1.右击该幅图像.2.选择Save Display并以新的文件名保存该幅图像.1.右击该图像.2.选择Save as AVI并以新的文件名保存该图像.234576保存到 CD-R 1.插入一张CD-R光盘.2.点击OK.3.选择文件并拖放到CD-R的窗口.4.点击Write these files to CD.5.点击Next.6.开始刻录.7.点击Finish按钮结束.关闭系统12341.选择File/Exit, 退出FV10-ASW软件.2.退出Windows XP.(1)选择Sta

26、rt/Shut Down. (2)在Shut Down窗口中, 选择Shut Down并点击OK按钮.3. 关闭激光器.(关闭钥匙开关.)3-1. 多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) OFF3-2. 氦氖绿 (543 nm) OFF3-3. 氦氖红 (633 nm) OFF4. 关闭汞灯电源.附录1共聚焦的原理和调节原理附录2获取图像如何降低背景噪音降低扫描速度通过降低扫描速度探测器从开始检测就忽略背景噪音.优点:相比Kalman方式, 能够取到更锐的图.缺点:单次扫描的速度很慢.1.选择扫描速度.*Auto ON:扫描速度变慢时, 背景噪音被去除而图像亮度不变.Auto OFF:扫描速度变慢时, 背景噪音被去除而图像亮度增加.Kalman方式通过重复获取一定数量的图像进行平均算法运算处理. 从而去除背景噪音和粗糙度.优点:单次扫描的速度很快.缺点:由于图像平均而图像模糊.1.点击Kalman并选择Line或Frame方式.2.输入累计数字(扫描的次数).